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Mouse CFL2(Cofilin 2, Muscle) ELISA Kit

產(chǎn)品屬性本產(chǎn)品采購屬于商業(yè)貿(mào)易行為

  • 市場價格: 2680
  • 產(chǎn)品型號:
  • 更新時間: 2024/11/7 20:52:47
  • 生產(chǎn)地: 中國大陸
  • 訪問次數(shù): 3次
  • 公司名稱: 上海信裕生物科技有限公司

企業(yè)檔案

上海信裕生物科技有限公司

9 營業(yè)執(zhí)照已上傳

企業(yè)類型:經(jīng)銷商

公司地址:上海市松江區(qū)賣新公路2077號(新九廣場)3樓8306室

主營產(chǎn)品:ELISA試劑盒,人ELISA試劑盒,小鼠ELISA試劑盒,大鼠ELISA試劑盒,單克隆抗體,多克隆抗體,重組蛋白,原代細胞,細胞系,分子生物學(xué)等科研產(chǎn)品

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產(chǎn)品簡介

Mouse CFL2(Cofilin 2, Muscle) ELISA Kit CFL2試劑盒;CFL2/Cofilin-2/Cofilin, muscle isoform

詳細內(nèi)容

公司簡介

Cat No.XY9M0921

Mouse CFL2(Cofilin 2, Muscle) ELISA Kit 
小鼠 CFL2
 ELISA試劑盒

尊敬的客戶,感謝你選用本公司的產(chǎn)品。本產(chǎn)品適用于體外定量檢測 小鼠血清、血漿或細胞培養(yǎng)上清液、組織等中天然和重組的CFL2濃度。檢測其他特殊樣本請咨詢本公司技術(shù)支持。試劑盒僅供科研使用。使用前請仔細閱讀說明書并檢查試劑盒組分。如有疑問,請聯(lián)系及時與我們聯(lián)系。

規(guī)格銷售價市場價
96T22782680
48T15301800

本試劑盒采用雙抗體夾心法,雙抗體夾心原理,是基于要測試的抗原具有二價以上的特性,能識別包被抗體,同時能識別檢測抗體,具體過程如下:

(1)將特異性抗體與固相載體連接,形成固相抗體,洗滌除去未結(jié)合的抗體及雜質(zhì),并用無關(guān)蛋白封閉空余結(jié)合位點。

(2)加受檢標本使之與固相抗體接觸反應(yīng)一段時間,讓標本中的抗原與固相載體上的抗體結(jié)合,形成固相抗原復(fù)合物。洗滌除去其他未結(jié)合的物質(zhì)。

(3)加生物素標記抗體,使固相免疫復(fù)合物上的抗原與生物素標記抗體結(jié)合。洗滌未結(jié)合的生物素標記抗體。此時固相載體上帶有的酶量與標本中受檢物質(zhì)的量正相關(guān)。

(4)加辣根過氧化物酶標記親和素,使生物素標記抗體與辣根過氧化物酶標記的親和素結(jié)合。洗滌未結(jié)合的酶標記物。此時固相載體上帶有的酶量與標本中受檢物質(zhì)的量正相關(guān)。

(5)加入底物顯色,即可計算標本濃度。

(6)注:一個抗體分子上可以標記上若干個生物素分子,一個生物素分子可以結(jié)合一個辣根過氧化物酶標記的親和素,從而帶來了大量的辣根過氧化物酶結(jié)合到抗體上,比傳統(tǒng)的直接辣根過氧化物酶標記抗體具有更高的敏感性和放大效應(yīng)。

[小鼠 CFL2酶聯(lián)免疫試劑盒檢測原理]

本實驗采用雙抗體夾心ELISA法。所提供的ELISA Kit是典型的夾心法酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒(ELISA)。預(yù)先包被的抗體為抗小鼠CFL2單克隆抗體。檢測相抗體為多克隆抗體,經(jīng)生物素(biotin)標記。樣品和生物素標記抗體先后加入酶標板孔反應(yīng)后,PBS或TBS洗滌。隨后加入過氧化物酶標記的親和素反應(yīng);經(jīng)過PBS或TBS的洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成*終的黃色。顏色的深淺和樣品中的待測因子呈正相關(guān)。 

[小鼠CFL2酶聯(lián)免疫試劑盒檢測原理示意圖]

圖片2.png 

 

[試劑盒組成]:

Name

96 Tests

48 Tests

Storage

Antibody precoated plate

8×12

8×6

4/-20℃

Mouse  CFL2 Standards

2 vial

1 vial

4/-20℃

Biotinylated antibody(1:100)

1vial

1 vial

4/-20℃

Enzyme conjugate(1:100)

1vial

1 vial

4/-20℃

Enzyme diluent

1vial

1 vial

4/-20℃

Antibody diluent

1vial

1 vial

4/-20℃

Standard diluent

1vial

1 vial

4/-20℃

Sample diluent

1vial

1 vial

4/-20℃

Washing buffer(1:25)

1vial

1 vial

4/-20℃

Colour Reagent A

1vial

1 vial

4/-20℃

Colour ReagentB

1vial

1 vial

4/-20℃

Colour ReagentC

1vial

1 vial

4/-20℃

Instruction

1 set

1 set

RT

 [試驗所需自備試驗設(shè)備和器材]:

1. 酶標儀(450nm檢測波長濾光片,570nm或630nm校正波長濾光片)。

2. 洗板機(可調(diào)注液量,保證每孔350μl洗液而不溢出)。

3. 超凈工作臺,生物安全柜,通風(fēng)柜。

4. 高精度單道加液器(量程為0.5-10μl,2-20μl,20-200μl,200-1000μl).

5. 高精度多道加液器(8道或12道,量程為50-300μl).

6. 37℃恒溫箱。

7. 低溫離心機。

8. 電冰箱(4℃,-20℃,-86℃).

9. 分析天平。

10. 剪刀,鑷子,鉗子等。

11. 漩渦混合儀,低頻振蕩器等。 

[試驗所需自備試驗耗材及試劑]:

1. 離心管(容量為1.5ml,5ml等)。

2. 一次性吸頭(量程為0.5-10μl,2-20μl,20-200μl,200-1000μl).

3. 純凈水或蒸餾水。

4. 坐標紙。

5. 吸水紙。

6. EDTA,枸櫞酸鈉,肝素 

[標本收集注意事項]:

1. 收集血液的試管應(yīng)為一次性的無熱原,無內(nèi)毒素試管。

2. 血清和血漿避免使用溶血,高血脂標本。

3. 標本應(yīng)清澈透明,懸浮物應(yīng)離心去除。

4. 標本收集后若不及時檢測,需按一次使用量分裝,凍存于-20℃,-80℃電冰箱內(nèi),避免反復(fù)凍融。

5. 可根據(jù)標本的實際情況,做適當倍數(shù)稀釋(建議做預(yù)實驗,以確定稀釋倍數(shù))。

6. 收集標本,盡量做到雙份的用量,避免一次實驗失敗,重復(fù)實驗時標本缺失,從而耽誤實驗進程。

7. 收集標本時,應(yīng)該做好防護措施(比如戴手套,口罩,護目鏡等),認為所有標本都具有一定的潛在危險性。

8. 樣本處理應(yīng)該在生物安全柜里面,并且正確使用生物安全柜。

[標本處理辦法]:

1. 血清:將采集的全血靜置冰箱4℃過夜,然后1000-3000rpm離心10分鐘,取上清立即測試,暫時不測可以放入-20℃(1-3個月)或-80℃(3-6個月)保存。

2. 血漿:用EDTA,枸櫞酸鈉,肝素等作為抗凝劑,加入血液混勻后,1000-3000rpm離心10分鐘,取上清立即測試,暫時不測可以放入-20℃(1-3個月)或-80℃(3-6個月)保存。

3. 組織勻漿:切取組織塊,0.01MPBS中過洗一次;按照1G組織加入5-10ml組織蛋白萃取試劑的比例,在冰水中勻漿。勻漿完成后,5000-10000rpm離心10分鐘,取上清立即測試,暫時不測可以放入-20℃(1-3個月)或-80℃(3-6個月)保存。

4. 細胞培養(yǎng)上清:1000-3000rpm離心10分鐘,取上清立即測試,暫時不測可以放入-20℃(1-3個月)或-80℃(3-6個月)保存。

5. 尿液,腹水,腦脊液等:1000-3000rpm離心10分鐘,取上清立即測試,暫時不測可以放入-20℃(1-3個月)或-80℃3-6個月)保存。 

注:樣品稀釋的一般原則

用戶須查閱相關(guān)文獻了解標本內(nèi)待測因子的含量,決定適當?shù)南♂尡稊?shù),以使稀釋后樣品中待測因子的濃度處于ELISA試劑盒的*佳檢測范圍。樣品的稀釋應(yīng)有詳細記錄。 

[注意事項]

1.試劑盒使用前請保存在2-8℃。除復(fù)溶后的標準品,其他成分不可凍結(jié)。

2.濃縮生物素化小鼠CFL2抗體,濃縮酶結(jié)合物體積小,運輸中顛簸和可能的倒置,會使液體沾到管壁或瓶蓋。因此使用前請用手甩幾下或1000rpm離心1分鐘,以使附著管壁或瓶蓋的液體沉積到管底。

3.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,使結(jié)晶完全溶解后再配制洗滌液。

4.測試過程中,小鼠CFL2凍干標準品為一次性使用,不得分裝。因其濃度較低,溶解兩小時候后,會迅速失活。

5.操作嚴格按照說明書進行,本試劑不同批號組分不得混用。

6.配制試劑時,要用旋渦混合儀混勻。加入孔內(nèi)的試劑,充分混勻?qū)y試結(jié)果尤為重要,使用微量振蕩器(使用頻率),如無微量振蕩器,可在反應(yīng)前手工輕輕晃動酶標板1分鐘,例如做圓周動作,使加入孔中的反應(yīng)液混勻。

7.實驗用酶標儀應(yīng)嚴格按使用說明書規(guī)范操作,并在使用前充分預(yù)熱。

8.酶免試驗中小鼠CFL2標準品和樣本檢測時建議作復(fù)孔。

9.將不用的微孔板放進原鋁箔袋中,置2-8℃保存。

10.顯色液對光敏感,因此要避免直接暴露在光線下。

11.超過使用日期的試劑盒不能應(yīng)用于實驗中。

12.試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準,使用雙波長檢測時,波長應(yīng)該設(shè)置為450nm和630nm.

13.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按生物廢棄物處理。終止液為2M硫酸,使用時必須注意安全。

14.各步驟加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校準其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi),如標本數(shù)量多,使用排槍加樣。

15.每次試驗測定的同時做標準曲線,做復(fù)孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標準品孔濃度的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,計算時請乘以總稀釋倍數(shù)(×n)。

16.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

17.以洗板機洗板時,每孔注液量不應(yīng)少于350μl,注意檢查加樣頭是否堵塞。手工洗板時,用帶紙屑的吸水材料應(yīng)慎重,防止外源性過氧化物酶類似物或氧化還原物與顯色劑發(fā)生反應(yīng)。

18.用終止液終止反應(yīng)后,請于10分鐘內(nèi)讀取OD值。

19.進行復(fù)孔實驗時,結(jié)果計算一定要求平均值。

20.標本溶血可能會有假陽性結(jié)果,因此溶血標本不宜進行此項檢測。

21.試驗時,應(yīng)該將加過樣品的板條放于密閉盒內(nèi),并保持濕度約60%左右。

22.為保證恒溫箱內(nèi)的溫度為37℃,恒溫箱的溫度要經(jīng)常校準。以確保實驗溫度保持恒定。

23.48T的試劑盒,所有組分均為96T的50%的量。

[檢測前準備工作]:

1.請?zhí)崆?0分鐘從冰箱中取出試劑盒,平衡至室溫后方可進行試驗。

2.將濃縮洗滌液用雙蒸水稀釋(1:25)。未用完的放回。

3.小鼠CFL2標準品:加入標準品稀釋液1.0ml至凍干小鼠CFL2標準品中,靜置10分鐘,待其充分溶解后,輕輕混勻(濃度為1600pg/ml),之后在管身標注①,然后根據(jù)需要進行稀釋。(建議標準曲線使用以下濃度:1600、800、400、200、100、50、25pg/ml)。注意:務(wù)必要保證凍干標準品溶解和混勻。

4.標準品稀釋方法圖例:取7支潔凈的試劑管,分別標注②,③,④,⑤,⑥,⑦,⑧.每管加入300μl標準品稀釋液。從第①管內(nèi)取出300μl加入到第②管,混勻后,再從第②管取出300μl加入到第③管,以此類推至第⑦管。第⑧管為標準品稀釋液,作為陰性對照使用。

圖片2.png

注:復(fù)溶標準品原液(1600pg/ml)請廢棄,不可重復(fù)使用。

5.生物素化小鼠CFL2抗體工作液:按當次試驗所需用量,用抗體稀釋液稀釋濃縮生物素化抗體(1:100),配置成生物素化抗體工作液。使用前30分鐘準備。僅供當日使用。

6.酶結(jié)合物工作液:按當次試驗所需要用量,用酶結(jié)合物稀釋液稀釋濃縮酶結(jié)合物(1:100),配置成酶結(jié)合物工作液。使用前30分鐘準備。僅供當日使用。

7.TMB顯色工作液:在使用之前30分鐘,按TMB顯色液A 9份加TMB顯色液B 1份(9:1)的比例配制TMB顯色工作液。

[洗滌方法]

1.自動洗板機:要求注入的洗滌液為350靗,注入與吸出間隔20-30秒。確保機器運用熟練后,再投入實驗中使用。

2.手工洗板:每孔加洗滌液350靗,靜置30秒后甩盡孔內(nèi)液體,在吸水紙上拍干。手工洗板時,注意加入洗液的過程中,不要造成孔間污染,從而出現(xiàn)跳孔的現(xiàn)象。 

[操作步驟]

1. 從已平衡至室溫的密封袋中取出試驗所需板條,未用的板條和干燥劑請放回鋁箔袋內(nèi)封存于2-8℃。

2. 預(yù)留空白孔(若使用雙波長讀板,空白孔可以不設(shè))。

3. 分別將標本或不同濃度小鼠CFL2標準品(0pg/ml孔加標準品稀釋液)加入相應(yīng)孔中(100靗/孔),37℃孵箱孵育90分鐘。

4. 提前30分鐘制備生物素化小鼠CFL2抗體工作液。

5. 洗板2次。

6. 加入生物素化小鼠CFL2抗體工作液(100靗/孔)。37℃孵箱孵育60分鐘。

7. 提前30分鐘制備酶結(jié)合物工作液。室溫避光放置。

8. 洗板3次。

9. 除空白孔外,加入酶結(jié)合物工作液(100μl/孔)。37℃孵箱,避光孵育30分鐘。

10. 洗板5次。

11. 加入TMB顯色工作液(包括空白孔)100μl/孔,37℃孵箱,避光孵育,當標準曲線高濃度的顏色較深,有明顯的顏色梯度的時候,即可終止。試驗顯色反應(yīng)請勿超過30分鐘。

12. 加入終止液(包括空白孔)100μl/孔,混勻后即刻測量OD(450nm)值(10分鐘內(nèi))。

[操作程序總結(jié)]:

圖片1.png 

[結(jié)果判斷]:

1.每個標準品和標本的OD值應(yīng)減去零孔的OD值。(若不減零孔值,標準曲線的零孔應(yīng)相交于Y軸)

2.手工繪制標準曲線。以標準品濃度作橫坐標,OD值作縱坐標,以平滑線連接各標準品的坐標點。通過標本的OD值可在標準曲線上查出其濃度。使用專業(yè)制作曲線軟件進行分析,如curve expert 1.3進行結(jié)果計算。

3.若標本OD值高于標準曲線上限,應(yīng)適當稀釋后重測,計算濃度時應(yīng)乘以稀釋倍數(shù)。 

[參考曲線]:

圖片1.png 

注意:本圖僅供參考,應(yīng)以同次試驗標準品所繪標準曲線來計算標本含量。 

試劑盒參數(shù)

[檢測范圍]:25-1600pg/ml

[靈敏度]:Zui小可測小鼠CFL2達15pg/ml

[特異性]:系統(tǒng)和其它因子無交叉反應(yīng)。

[批間差]:≤12%.

[批內(nèi)差]:≤8%.

[回收率]:70-110%.

[保存]:-20℃ [短期內(nèi)(如兩周)可4℃]

[用途]:用于體外定量分析液體標本(通用型)。

[規(guī)格]:96T/48T

[生產(chǎn)日期]:見酶標板鋁箔袋封口鋼印。

[保質(zhì)期]:12個月(-20℃) 

[ELISA常見問題及解決方案]:

問題

可能的原因

解決方法

 

陰性質(zhì)控值偏高

試劑或者耗材污染

更換試劑,使用一次性耗材

洗板不充分

更換更強配方的洗滌液,增加洗板次數(shù),延長洗板時間

抗體量使用量過高

適當減少抗體使用量

 

 

 

整板出現(xiàn)高背景

(陽性值)

二抗產(chǎn)生了非特異性吸附

減少二抗使用量,縮短二抗反應(yīng)時間

顯色液變質(zhì)

更換顯色液

顯色反應(yīng)時間過長

控制顯色反應(yīng)時間,及時終止反應(yīng)

試劑或者耗材污染

更換試劑,使用一次性耗材

封閉條件不佳導(dǎo)致的非特異性吸附

更換封閉能力更強的封閉液,延長封閉時間

 

 

 

反應(yīng)信號偏低

包被條件不合適

提高包板濃度,延長包板時間,更換包被緩沖液

抗原抗體反應(yīng)不夠充分

延長孵育時間,確保反應(yīng)在*適溫度下進行

顯色液配方不恰當

增加顯色底物的量

二抗結(jié)合效果不佳

提高二抗?jié)舛,延長反應(yīng)時間,更換效果更好的二抗

 

 

 

梯度稀釋時產(chǎn)生跳孔現(xiàn)象

酶標板疊放導(dǎo)致傳熱不均勻,各孔反應(yīng)溫度有差異

盡量避免酶標板疊放在一起

移液器稀釋時未能保持連續(xù)性

定期校準移液器,確保移液器的正確使用

反應(yīng)溶液蒸發(fā)

酶標板用封條密封或者加蓋

洗板不均勻

確定洗板機能夠正常工作

酶標板底有雜物或者水珠

讀板時清理干凈酶標板底部

 

圖片1.png

特別提示:本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途!以實際收貨產(chǎn)品說明書為準,網(wǎng)站說明書僅供參考! 


關(guān)鍵詞:Mouse  CFL2試劑盒  Cofilin  2  Muscle試劑盒  小鼠CFL2(Cofilin2  肌肉)ELISA試劑盒  

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