Cat No.XY9H0985
Human PGA3(Pepsin A) ELISA Kit
人 Pepsin A ELISA試劑盒
尊敬的客戶，感謝你選用本公司的產(chǎn)品。本產(chǎn)品適用于體外定量檢測 人血清、血漿或細胞培養(yǎng)上清液、組織等中天然和重組的Pepsin A濃度。檢測其他特殊樣本請咨詢本公司技術支持。試劑盒僅供科研使用。使用前請仔細閱讀說明書并檢查試劑盒組分。如有疑問，請聯(lián)系及時與我們聯(lián)系。
| 規(guī)格 | 銷售價 | 市場價 |
| 96T | 2278 | 2680 |
| 48T | 1530 | 1800 |
本試劑盒采用雙抗體夾心法，雙抗體夾心原理，是基于要測試的抗原具有二價以上的特性，能識別包被抗體，同時能識別檢測抗體，具體過程如下：
（1）將特異性抗體與固相載體連接，形成固相抗體，洗滌除去未結(jié)合的抗體及雜質(zhì)，并用無關蛋白封閉空余結(jié)合位點。
（2）加受檢標本使之與固相抗體接觸反應一段時間，讓標本中的抗原與固相載體上的抗體結(jié)合，形成固相抗原復合物。洗滌除去其他未結(jié)合的物質(zhì)。
（3）加生物素標記抗體，使固相免疫復合物上的抗原與生物素標記抗體結(jié)合。洗滌未結(jié)合的生物素標記抗體。此時固相載體上帶有的酶量與標本中受檢物質(zhì)的量正相關。
（4）加辣根過氧化物酶標記親和素，使生物素標記抗體與辣根過氧化物酶標記的親和素結(jié)合。洗滌未結(jié)合的酶標記物。此時固相載體上帶有的酶量與標本中受檢物質(zhì)的量正相關。
（5）加入底物顯色，即可計算標本濃度。
（6）注：一個抗體分子上可以標記上若干個生物素分子，一個生物素分子可以結(jié)合一個辣根過氧化物酶標記的親和素，從而帶來了大量的辣根過氧化物酶結(jié)合到抗體上，比傳統(tǒng)的直接辣根過氧化物酶標記抗體具有更高的敏感性和放大效應。
[人 Pepsin A酶聯(lián)免疫試劑盒檢測原理]：
本實驗采用雙抗體夾心ELISA法。所提供的ELISA Kit是典型的夾心法酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒（ELISA）。預先包被的抗體為抗人Pepsin A單克隆抗體。檢測相抗體為多克隆抗體，經(jīng)生物素（biotin）標記。樣品和生物素標記抗體先后加入酶標板孔反應后，PBS或TBS洗滌。隨后加入過氧化物酶標記的親和素反應；經(jīng)過PBS或TBS的洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成*終的黃色。顏色的深淺和樣品中的待測因子呈正相關。
[人Pepsin A酶聯(lián)免疫試劑盒檢測原理示意圖]：
[試劑盒組成]：
Name | 96 Tests | 48 Tests | Storage |
Antibody precoated plate | 8×12 | 8×6 | 4/-20℃ |
Human Pepsin A Standards | 2 vial | 1 vial | 4/-20℃ |
Biotinylated antibody(1:100) | 1vial | 1 vial | 4/-20℃ |
Enzyme conjugate(1:100) | 1vial | 1 vial | 4/-20℃ |
Enzyme diluent | 1vial | 1 vial | 4/-20℃ |
Antibody diluent | 1vial | 1 vial | 4/-20℃ |
Standard diluent | 1vial | 1 vial | 4/-20℃ |
Sample diluent | 1vial | 1 vial | 4/-20℃ |
Washing buffer(1:25) | 1vial | 1 vial | 4/-20℃ |
Colour Reagent A | 1vial | 1 vial | 4/-20℃ |
Colour ReagentB | 1vial | 1 vial | 4/-20℃ |
Colour ReagentC | 1vial | 1 vial | 4/-20℃ |
Instruction | 1 set | 1 set | RT |
[試驗所需自備試驗設備和器材]：
1. 酶標儀(450nm檢測波長濾光片，570nm或630nm校正波長濾光片)。
2. 洗板機（可調(diào)注液量，保證每孔350μl洗液而不溢出）。
3. 超凈工作臺，生物安全柜，通風柜。
4. 高精度單道加液器（量程為0.5-10μl,2-20μl,20-200μl,200-1000μl).
5. 高精度多道加液器（8道或12道，量程為50-300μl).
6. 37℃恒溫箱。
7. 低溫離心機。
8. 電冰箱（4℃,-20℃,-86℃）.
9. 分析天平。
10. 剪刀，鑷子，鉗子等。
11. 漩渦混合儀，低頻振蕩器等。
[試驗所需自備試驗耗材及試劑]：
1. 離心管（容量為1.5ml，5ml等）。
2. 一次性吸頭（量程為0.5-10μl,2-20μl,20-200μl,200-1000μl）.
3. 純凈水或蒸餾水。
4. 坐標紙。
5. 吸水紙。
6. EDTA，枸櫞酸鈉，肝素
[標本收集注意事項]：
1. 收集血液的試管應為一次性的無熱原，無內(nèi)毒素試管。
2. 血清和血漿避免使用溶血，高血脂標本。
3. 標本應清澈透明，懸浮物應離心去除。
4. 標本收集后若不及時檢測，需按一次使用量分裝，凍存于-20℃，-80℃電冰箱內(nèi)，避免反復凍融。
5. 可根據(jù)標本的實際情況，做適當倍數(shù)稀釋(建議做預實驗，以確定稀釋倍數(shù))。
6. 收集標本，盡量做到雙份的用量，避免一次實驗失敗，重復實驗時標本缺失，從而耽誤實驗進程。
7. 收集標本時，應該做好防護措施（比如戴手套，口罩，護目鏡等），認為所有標本都具有一定的潛在危險性。
8. 樣本處理應該在生物安全柜里面，并且正確使用生物安全柜。
[標本處理辦法]：
1. 血清：將采集的全血靜置冰箱4℃過夜，然后1000-3000rpm離心10分鐘，取上清立即測試，暫時不測可以放入-20℃（1-3個月）或-80℃（3-6個月）保存。
2. 血漿：用EDTA，枸櫞酸鈉，肝素等作為抗凝劑，加入血液混勻后，1000-3000rpm離心10分鐘，取上清立即測試，暫時不測可以放入-20℃（1-3個月）或-80℃（3-6個月）保存。
3. 組織勻漿：切取組織塊，0.01MPBS中過洗一次；按照1G組織加入5-10ml組織蛋白萃取試劑的比例，在冰水中勻漿。勻漿完成后，5000-10000rpm離心10分鐘，取上清立即測試，暫時不測可以放入-20℃（1-3個月）或-80℃（3-6個月）保存。
4. 細胞培養(yǎng)上清：1000-3000rpm離心10分鐘，取上清立即測試，暫時不測可以放入-20℃（1-3個月）或-80℃（3-6個月）保存。
5. 尿液，腹水，腦脊液等：1000-3000rpm離心10分鐘，取上清立即測試，暫時不測可以放入-20℃（1-3個月）或-80℃3-6個月）保存。
注：樣品稀釋的一般原則
用戶須查閱相關文獻了解標本內(nèi)待測因子的含量，決定適當?shù)南♂尡稊?shù)，以使稀釋后樣品中待測因子的濃度處于ELISA試劑盒的*佳檢測范圍。樣品的稀釋應有詳細記錄。
[注意事項]：
1．試劑盒使用前請保存在2-8℃。除復溶后的標準品，其他成分不可凍結(jié)。
2．濃縮生物素化人Pepsin A抗體，濃縮酶結(jié)合物體積小，運輸中顛簸和可能的倒置，會使液體沾到管壁或瓶蓋。因此使用前請用手甩幾下或1000rpm離心1分鐘，以使附著管壁或瓶蓋的液體沉積到管底。
3．濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，使結(jié)晶完全溶解后再配制洗滌液。
4．測試過程中，人Pepsin A凍干標準品為一次性使用，不得分裝。因其濃度較低，溶解兩小時候后，會迅速失活。
5．操作嚴格按照說明書進行，本試劑不同批號組分不得混用。
6．配制試劑時，要用旋渦混合儀混勻。加入孔內(nèi)的試劑，充分混勻?qū)y試結(jié)果尤為重要，使用微量振蕩器(使用頻率)，如無微量振蕩器，可在反應前手工輕輕晃動酶標板1分鐘，例如做圓周動作，使加入孔中的反應液混勻。
7．實驗用酶標儀應嚴格按使用說明書規(guī)范操作，并在使用前充分預熱。
8．酶免試驗中人Pepsin A標準品和樣本檢測時建議作復孔。
9．將不用的微孔板放進原鋁箔袋中，置2-8℃保存。
10．顯色液對光敏感，因此要避免直接暴露在光線下。
11．超過使用日期的試劑盒不能應用于實驗中。
12．試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準，使用雙波長檢測時，波長應該設置為450nm和630nm.
13．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按生物廢棄物處理。終止液為2M硫酸，使用時必須注意安全。
14．各步驟加樣均應使用加樣器，并經(jīng)常校準其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi)，如標本數(shù)量多，使用排槍加樣。
15．每次試驗測定的同時做標準曲線，做復孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標準品孔濃度的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定，計算時請乘以總稀釋倍數(shù)（×n）。
16．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
17．以洗板機洗板時,每孔注液量不應少于350μl,注意檢查加樣頭是否堵塞。手工洗板時,用帶紙屑的吸水材料應慎重,防止外源性過氧化物酶類似物或氧化還原物與顯色劑發(fā)生反應。
18．用終止液終止反應后，請于10分鐘內(nèi)讀取OD值。
19．進行復孔實驗時，結(jié)果計算一定要求平均值。
20．標本溶血可能會有假陽性結(jié)果，因此溶血標本不宜進行此項檢測。
21．試驗時，應該將加過樣品的板條放于密閉盒內(nèi)，并保持濕度約60%左右。
22．為保證恒溫箱內(nèi)的溫度為37℃，恒溫箱的溫度要經(jīng)常校準。以確保實驗溫度保持恒定。
23．48T的試劑盒，所有組分均為96T的50%的量。
[檢測前準備工作]：
1.請?zhí)崆?0分鐘從冰箱中取出試劑盒，平衡至室溫后方可進行試驗。
2.將濃縮洗滌液用雙蒸水稀釋(1:25)。未用完的放回。
3.人Pepsin A標準品:加入標準品稀釋液1.0ml至凍干人Pepsin A標準品中，靜置10分鐘，待其充分溶解后，輕輕混勻(濃度為800 pg/ml)，之后在管身標注①，然后根據(jù)需要進行稀釋。(建議標準曲線使用以下濃度：800、400、200、100、50、25、12.5 pg/ml)。注意：務必要保證凍干標準品溶解和混勻。
4.標準品稀釋方法圖例：取7支潔凈的試劑管，分別標注②,③,④,⑤,⑥,⑦,⑧.每管加入300μl標準品稀釋液。從第①管內(nèi)取出300μl加入到第②管，混勻后，再從第②管取出300μl加入到第③管，以此類推至第⑦管。第⑧管為標準品稀釋液，作為陰性對照使用。
注：復溶標準品原液（800Pg/ml）請廢棄，不可重復使用。
5.生物素化人Pepsin A抗體工作液：按當次試驗所需用量，用抗體稀釋液稀釋濃縮生物素化抗體(1:100)，配置成生物素化抗體工作液。使用前30分鐘準備。僅供當日使用。
6.酶結(jié)合物工作液：按當次試驗所需要用量，用酶結(jié)合物稀釋液稀釋濃縮酶結(jié)合物(1:100)，配置成酶結(jié)合物工作液。使用前30分鐘準備。僅供當日使用。
7.TMB顯色工作液：在使用之前30分鐘，按TMB顯色液A 9份加TMB顯色液B 1份（9：1）的比例配制TMB顯色工作液。
[洗滌方法]：
1．自動洗板機：要求注入的洗滌液為350靗，注入與吸出間隔20－30秒。確保機器運用熟練后，再投入實驗中使用。
2．手工洗板：每孔加洗滌液350靗，靜置30秒后甩盡孔內(nèi)液體，在吸水紙上拍干。手工洗板時，注意加入洗液的過程中，不要造成孔間污染，從而出現(xiàn)跳孔的現(xiàn)象。
[操作步驟]：
1. 從已平衡至室溫的密封袋中取出試驗所需板條，未用的板條和干燥劑請放回鋁箔袋內(nèi)封存于2-8℃。
2. 預留空白孔（若使用雙波長讀板，空白孔可以不設）。
3. 分別將標本或不同濃度人Pepsin A標準品（0pg/ml孔加標準品稀釋液）加入相應孔中(100靗/孔)，37℃孵箱孵育90分鐘。
4. 提前30分鐘制備生物素化人Pepsin A抗體工作液。
5. 洗板2次。
6. 加入生物素化人Pepsin A抗體工作液(100靗/孔)。37℃孵箱孵育60分鐘。
7. 提前30分鐘制備酶結(jié)合物工作液。室溫避光放置。
8. 洗板3次。
9. 除空白孔外，加入酶結(jié)合物工作液(100μl/孔)。37℃孵箱，避光孵育30分鐘。
10. 洗板5次。
11. 加入TMB顯色工作液（包括空白孔）100μl/孔，37℃孵箱，避光孵育，當標準曲線高濃度的顏色較深，有明顯的顏色梯度的時候，即可終止。試驗顯色反應請勿超過30分鐘。
12. 加入終止液（包括空白孔）100μl/孔，混勻后即刻測量OD（450nm）值(10分鐘內(nèi))。
[操作程序總結(jié)]：
[結(jié)果判斷]：
1．每個標準品和標本的OD值應減去零孔的OD值。（若不減零孔值，標準曲線的零孔應相交于Y軸）
2．手工繪制標準曲線。以標準品濃度作橫坐標，OD值作縱坐標，以平滑線連接各標準品的坐標點。通過標本的OD值可在標準曲線上查出其濃度。使用專業(yè)制作曲線軟件進行分析，如curve expert 1.3進行結(jié)果計算。
3．若標本OD值高于標準曲線上限，應適當稀釋后重測，計算濃度時應乘以稀釋倍數(shù)。
[參考曲線]：
注意：本圖僅供參考，應以同次試驗標準品所繪標準曲線來計算標本含量。
試劑盒參數(shù)：
[檢測范圍]：12.5-800pg/ml
[靈敏度]：Zui小可測人Pepsin A達7.5pg/ml
[特異性]：系統(tǒng)和其它因子無交叉反應。
[批間差]：≤12%.
[批內(nèi)差]：≤8%.
[回收率]：70-110%.
[保存]：-20℃ [短期內(nèi)（如兩周）可4℃]
[用途]：用于體外定量分析液體標本（通用型）。
[規(guī)格]：96T/48T
[生產(chǎn)日期]：見酶標板鋁箔袋封口鋼印。
[保質(zhì)期]：12個月（-20℃）
[ELISA常見問題及解決方案]:
問題 | 可能的原因 | 解決方法 |
陰性質(zhì)控值偏高 | 試劑或者耗材污染 | 更換試劑，使用一次性耗材 |
洗板不充分 | 更換更強配方的洗滌液，增加洗板次數(shù)，延長洗板時間 | |
抗體量使用量過高 | 適當減少抗體使用量 | |
整板出現(xiàn)高背景 （陽性值） | 二抗產(chǎn)生了非特異性吸附 | 減少二抗使用量，縮短二抗反應時間 |
顯色液變質(zhì) | 更換顯色液 | |
顯色反應時間過長 | 控制顯色反應時間，及時終止反應 | |
試劑或者耗材污染 | 更換試劑，使用一次性耗材 | |
封閉條件不佳導致的非特異性吸附 | 更換封閉能力更強的封閉液，延長封閉時間 | |
反應信號偏低 | 包被條件不合適 | 提高包板濃度，延長包板時間，更換包被緩沖液 |
抗原抗體反應不夠充分 | 延長孵育時間，確保反應在*適溫度下進行 | |
顯色液配方不恰當 | 增加顯色底物的量 | |
二抗結(jié)合效果不佳 | 提高二抗?jié)舛�，延長反應時間，更換效果更好的二抗 | |
梯度稀釋時產(chǎn)生跳孔現(xiàn)象 | 酶標板疊放導致傳熱不均勻，各孔反應溫度有差異 | 盡量避免酶標板疊放在一起 |
移液器稀釋時未能保持連續(xù)性 | 定期校準移液器，確保移液器的正確使用 | |
反應溶液蒸發(fā) | 酶標板用封條密封或者加蓋 | |
洗板不均勻 | 確定洗板機能夠正常工作 | |
酶標板底有雜物或者水珠 | 讀板時清理干凈酶標板底部 |
特別提示:本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途!以實際收貨產(chǎn)品說明書為準,網(wǎng)站說明書僅供參考！
關鍵詞：Human PGA3試劑盒 Pepsin A試劑盒 人PGA3(胃蛋白酶A)ELISA試劑盒
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