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流式細胞儀流程: 基本操作:
1:收集細胞:胰酶消化各孔(6孔板),收集到離心管,離心得沉淀;
2:用PBS打勻,洗1-2遍,離心,沉淀;
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3:沉淀的細胞中加入500uL緩沖液,得懸液;
4:加5uL AnnexinV-FITC(細胞凋亡檢測試劑盒),混勻;
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5:5uLPI混勻;(4)-(6)三組需要避光操作!
6:流式細胞儀測定。(4×105/孔,6孔板,2mL/孔) 若第二天流式測量,可加5—10mL70%乙醇,在4℃固定8h以上。
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制備細胞凋亡單染管: 活細胞
一半活細胞+一半死細胞(高溫滅活-水浴90℃)+FITC(染色活Cell)
一半活細胞+一半死細胞+PI(PI-碘化丙啶染色核酸,但不能穿透細胞膜即染色死Cell)
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一半活細胞+一半死細胞+FITC(堿性環(huán)境與抗體蛋白反應,主要是與賴氨酸的氨基與熒光素的硫碳胺鍵結合,形成FITC-蛋白質結合)+PI PBS的配制:(1000mL) NaCl 8.0 g 、KCl 0.2 g、 KH2PO4 0.2 g 、Na2HPO4.12H2O 2.9 g 加超純水至1000mL高壓蒸汽滅菌,4℃儲存,備用。 細胞器具清洗: 瓶、管等+潔消精(過夜12 h),自來水沖洗25遍,蒸餾水
關鍵詞:HT-1080細胞