Anti-HEF1抗體,蛋白激酶底物相關(guān)蛋白抗體
抗體種屬:兔多抗,小鼠單抗
濃度:1mg/ml。
抗體的相關(guān)標(biāo)記:
HRP,Biotin,Gold,RBITC,AP,FITC,Cy3,Cy5,Cy5.5,Cy7,PE,PE-Cy3,PE-Cy5,PE-Cy5.5,PE-Cy7,APC,Alexa Fluor 350,Alexa Fluor 488,Alexa Fluor 555,
Alexa Fluor 647
Anti-HEF1抗體,蛋白激酶底物相關(guān)蛋白抗體交叉反應(yīng):human,rat,mouse,pig,dog
應(yīng)用:可以用于做石蠟切片免疫組化,冰凍切片免疫組化,Elisa,WB,免疫熒光等實(shí)驗(yàn)。(公司備有抗體及以下抗體做免疫組化與WB所需的二抗)
稀釋:
1、Western Blotting (starting dilution 1:200, dilution range1:100-1:1000)
2、Immunoprecipitation [1-2 μg per 100-500 μg of total protein(1 ml ofcell lysate)]
3、Immunofluorescence (starting dilution 1:50, dilution range 1:50-1:500)
4、ELISA (starting dilution 1:30, dilution range 1:30-1:3000)
5、Immunohistochemistry(including paraffin-embedded sections) (starting dilution 1:50 dilution range 1:50-1:500)
Anti-HEF1抗體,蛋白激酶底物相關(guān)蛋白抗體<>
要獲得漂亮的Western Blot結(jié)果,離不開(kāi)一株質(zhì)量?jī)?yōu)異的抗體?贵w選擇有很多需要注意的地方,選擇單抗還是多抗,什么種屬的,用不用考慮免疫原,價(jià)格如何等等。這些在其他地方已經(jīng)有過(guò)比較多的討論,這里提出這個(gè)問(wèn)題,主要想強(qiáng)調(diào)兩個(gè)經(jīng)常被忽視的因素:
1. 靈敏度/檢測(cè)限
“靈敏度”最初是一個(gè)統(tǒng)計(jì)學(xué)概念,表示樣本中檢測(cè)結(jié)果陽(yáng)性數(shù)占所有陽(yáng)性樣品的比例。擴(kuò)展到各個(gè)領(lǐng)域當(dāng)中就成為各種機(jī)器或方法的性能指標(biāo),靈敏度越高,越能反應(yīng)測(cè)定值的實(shí)際情況。在Western Blot試驗(yàn)中,如果要量化抗體檢測(cè)的靈敏度就需要一個(gè)參數(shù)——抗體檢測(cè)限?贵w檢測(cè)限越低,說(shuō)明會(huì)有越少的待測(cè)抗原被漏檢。因此,對(duì)于定性或半定量的Western Blot試驗(yàn)而言,抗體檢測(cè)限是一個(gè)重要指標(biāo),抗體檢測(cè)限低的抗體效能高,使用這樣的抗體可以獲得更真實(shí)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。所以,選購(gòu)抗體用作WB實(shí)驗(yàn),在可能的情況下要選擇檢測(cè)限更低的抗體。
2. 注意1抗體,阿米洛利結(jié)合蛋白1抗體,用于WB、FITC、IHC-P、IHC-F、IF、Elisa濃度
抗體濃度對(duì)于商品化抗體的影響有兩方面。首先,較高濃度的抗體(>0.5mg/mL)通常性質(zhì)更穩(wěn)定,受生產(chǎn)工藝和成本控制等因素影響,不同品牌的抗體的濃度也不相同,所以購(gòu)買時(shí)應(yīng)注意比較;另外,經(jīng)驗(yàn)不足的實(shí)驗(yàn)者往往被抗體的體積迷惑,然而相同質(zhì)量下,低濃度的抗體體積更大(例如有的經(jīng)銷商會(huì)對(duì)抗體進(jìn)行惡意稀釋再轉(zhuǎn)售),所以,計(jì)算抗體性價(jià)比的時(shí)候應(yīng)該考慮的因素是抗體的質(zhì)量而非體積。
孵育一抗
A. 先將需要檢測(cè)的抗體準(zhǔn)備好,并決定好它們的稀釋度。
B. 配好5%的Milk(TBST溶解),按要求稀釋好抗體。注意,如需高比例稀釋,
最好采用梯度稀釋。
C. 將稀釋好的抗體和膜一起孵育。 一般采用RT 1小時(shí),可根據(jù)抗體量和膜上
抗原量適當(dāng)延長(zhǎng)或縮短時(shí)間。
注意:為了便于后面分析結(jié)果,我們一般會(huì)選用已確定分子量大小而且純度高的抗體作為marker與一抗同時(shí)孵育。
洗滌
用 TBST先快速洗三次,把milk盡快的wash掉。然后5mins *5。
洗滌是為了洗去一抗與抗原的非特異性結(jié)合,洗滌的效果直接影響結(jié)果背景的深淺。
孵育二抗
孵育 RT1 小時(shí)。 一般采用HRP標(biāo)記的二抗,稀釋比例為1:5000。二抗的稀釋比例不能太低,否則容易導(dǎo)致非特異性的結(jié)合。注意二抗的選擇有多種,要根據(jù)一抗來(lái)選擇抗兔、抗鼠或者抗羊的二抗,以及根據(jù)后面的顯色條件來(lái)選擇HRP、AP或者GOD(葡萄糖氧化酶)酶鏈的二抗或者標(biāo)志其他探針(如核素等)的。
洗滌:用TBST先快速洗三次,把milk盡快的wash掉。 然后5mins *5。
洗滌是為了洗去二抗的非特異性結(jié)合,洗滌的效果直接影響結(jié)果背景的深淺,所以洗滌一定要干凈。
公司竭誠(chéng)為您提供 Anti-HEF1抗體,蛋白激酶底物相關(guān)蛋白抗體,用于WB、FITC、IHC-P、IHC-F、IF、Elisa等,歡迎來(lái)電咨詢訂購(gòu)!
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