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ELISA的基礎(chǔ)是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記。結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性，酶標(biāo)記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性，又保留酶的活性。在測(cè)定時(shí)，受檢標(biāo)本（測(cè)定其中的抗體或抗原）與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與液體中的其他物質(zhì)分開。再加入酶標(biāo)記的抗原或抗體，也通過反應(yīng)而結(jié)合在固相載體上。此時(shí)固相上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化成為有色產(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，故可根據(jù)呈色的深淺進(jìn)行定性或定量分析。

二．實(shí)驗(yàn)材料與試劑配制

1.儀器與材料：酶標(biāo)儀（使用前預(yù)熱30分鐘），微量加液器、吸頭、蒸餾水或去離子水，濾紙。

2. 洗液的配制：按1:30的比例配制洗液備用。

三．樣品收集、處理及保存

1）.細(xì)胞培養(yǎng)上清：

適用于檢測(cè)體外培養(yǎng)的細(xì)胞分泌性成份。用無菌管收集細(xì)胞上清液，以1000×g離心15分鐘，收集上清。

2）細(xì)胞：

用PBS反復(fù)洗滌細(xì)胞3次，調(diào)整細(xì)胞濃度達(dá)到104-106/ml 左右，通過反復(fù)凍融，使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份，或者細(xì)胞超聲粉碎，離心取上清液檢測(cè)。

3）血清：

在室溫下，血液自然凝固，以1000×g離心15分鐘，取上清待測(cè)。

4）血漿：

應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA 或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合后靜置10-20 分鐘后，以1000×g離心15分鐘，收集上清。

5）體液：

包括胸腹水、腦脊液，分泌物等。使用不含熱原和內(nèi)毒素的離心管收集，以1000×g離心15分鐘，收集上清。

6.）組織標(biāo)本：

切取組織標(biāo)本，稱取重量0.5mg，加入500ul 的PBS，用手工或勻漿器，或超聲破碎儀將標(biāo)本勻漿，以2000-3000 rmp離心20 分鐘，收集上清進(jìn)行檢測(cè)。

樣品中不能含有NaN3，因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

7）保存：

如果樣品不能立即檢測(cè)，應(yīng)將其分裝，-70 ℃保存，避免反復(fù)冷凍。保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心。血液標(biāo)本盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中含大量顆粒，檢測(cè)前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

四．操作步驟

1）取出試劑盒，室溫（20-25℃）放置30分鐘。

2）分組：取出96孔板，根據(jù)待測(cè)樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)，把剩余的板條繼續(xù)冷藏處理。分別設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品組（6個(gè)濃度）、空白孔、待測(cè)樣品組。

3）標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：準(zhǔn)備小試管6 只，依次編好號(hào)碼，先在各小試管中加入標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液100ul，然后取原濃度標(biāo)準(zhǔn)品100ul加入一只已編好號(hào)的試管中，充分混勻;再在該試管中取100ul 加入第二支試管中，充分混勻；再在該試管中取100ul加入第三只試管中，充分混勻；再在該試管中取100ul 加入第四只試管中，充分混勻；再在該試管中取100ul加入第五只試管中，充分混勻；然后在該試管中取100ul，棄掉。第六只試管作為0 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品。

注：為減少實(shí)驗(yàn)誤差，保證準(zhǔn)確性，建議設(shè)置復(fù)孔。

4）加樣：依照標(biāo)準(zhǔn)品的順序分別加入50ul的標(biāo)準(zhǔn)品溶液于空白微孔中；空白對(duì)照孔加入50ul的蒸餾水；其余微孔中先加樣品40ul然后再加生物素標(biāo)記的抗體10ul。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。

5）溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。

6）洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30 秒棄去，如此重復(fù)5 次，拍干。

7）加酶標(biāo)溶液：標(biāo)準(zhǔn)品組、待測(cè)樣本組各孔中加入50ul的酶標(biāo)溶液（空白對(duì)照孔除外）。

8）溫育：酶標(biāo)板用封板紙密封后，放入濕盒內(nèi)于37℃恒溫孵育1小時(shí)。

9）洗板：用稀釋后的洗滌液注滿每孔，靜置15-30s，充分清洗酶標(biāo)板5次，用吸水紙徹底拍干。

10）顯色：各孔加入顯色劑A液50ul后，再加入顯色劑B液50ul。

11）終止：25-37℃下避光反應(yīng)10-15分鐘，加入50ul終止液。

12）讀板：在450nm波長讀取各孔的OD值。

注：讀板時(shí)必須拭干板底殘留的液體和手指痕跡，讀板時(shí)間控制在終止反應(yīng)后的30分鐘內(nèi)，以免影響準(zhǔn)確性。

五．?dāng)?shù)據(jù)計(jì)算

以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計(jì)算出樣品濃度，即為樣品的實(shí)際濃度。

六．注意事項(xiàng)

1）實(shí)驗(yàn)操作中必須使用一次性吸頭，避免交叉污染。

2）加樣：加樣時(shí)，要控制加樣速度，避免第一孔與最后一孔間的時(shí)間間隔過大，否則將會(huì)導(dǎo)致不同的預(yù)孵育時(shí)間，從而影響實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性以及重復(fù)性。

3）孵育：嚴(yán)格按照說明書上規(guī)定的孵育時(shí)間和溫度進(jìn)行。

反應(yīng)時(shí)間的控制：加入底物后請(qǐng)定時(shí)觀察反應(yīng)孔的顏色變化，如果顏色較深，請(qǐng)?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應(yīng)。

4）建議實(shí)驗(yàn)前預(yù)測(cè)樣品含量，如樣品濃度過高，應(yīng)對(duì)樣品進(jìn)行稀釋，計(jì)算結(jié)果時(shí)乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。

5）建議使用本試劑盒時(shí)先做預(yù)實(shí)驗(yàn)（即先做標(biāo)準(zhǔn)曲線，試用幾個(gè)標(biāo)本），如果對(duì)本試劑盒有任何疑問，可和所購經(jīng)銷商聯(lián)系，如果因運(yùn)輸過程導(dǎo)致試劑盒失效，可要求調(diào)換，但概不承擔(dān)產(chǎn)品本身以外的任何損失。

七．保存條件及有效期

1.試劑盒保存：2-8℃

2.有效期：6個(gè)月

八．訂貨說明

1）賣方確保所訂產(chǎn)品與目錄技術(shù)指標(biāo)保持一致；

2）為了確保買方產(chǎn)品在運(yùn)輸中的質(zhì)量，對(duì)有特殊要求的低溫產(chǎn)品予以濕冰運(yùn)輸。

3）收到貨物后如出現(xiàn)質(zhì)量問題，買方需在收到貨物一個(gè)月內(nèi)向賣方提出書面異議。買方逾期不提出異議，視為貨物符合其要求，賣方不付任何責(zé)任。

4）出現(xiàn)質(zhì)量以外的問題，如破損等，買方應(yīng)在收貨后一個(gè)周內(nèi)提出。買方未按時(shí)提出異議，視為該產(chǎn)品合格。

本公司對(duì)所有售出的產(chǎn)品保證質(zhì)量，并提供良好的售后服務(wù)，有關(guān)產(chǎn)品質(zhì)量的投訴，請(qǐng)?jiān)谑盏截浳锏?2天內(nèi)以書面形式提出，并向我公司技術(shù)人員提供相應(yīng)的材料，我們會(huì)及時(shí)派人解決。所有形式的賠償或退換僅限于產(chǎn)品本身，不涉及其他間接內(nèi)容。凡購買本公司任意款elisa試劑盒，均可享受免費(fèi)代測(cè)服務(wù)，并提供技術(shù)指導(dǎo)。

D-天冬氨酸英文名：D-Aspartic acid規(guī)格：BR，99%CAS號(hào)：1783-96-6包裝：25克價(jià)格：70別名：D-天冬氨酸; D-天門冬氨酸; D-天冬酸; D（-）氨基丁二酸; D（-）氨基琥珀酸其他包裝：25克;100克;1公斤

D-天門冬氨酸-β-甲酯 H-D-Aspartic acid-β-methyl ester 21394-81-0的性狀為：D-天門冬氨酸-β-甲酯的參數(shù)標(biāo)準(zhǔn)為：（現(xiàn)貨供應(yīng)）一、CAS號(hào)碼為：21394-81-0二、其他國際通用標(biāo)號(hào)：MDL：－－BEILSTERIN：EINECS為：－－三、其他通用名稱：D-天門冬氨酸-β-甲酯四、分子式：五、分子量值：六、分子結(jié)構(gòu)標(biāo)準(zhǔn)模型：七、純度值：≥95 % 八、外觀特征：九、存放辦法：上海田源專業(yè)銷售氨基酸產(chǎn)品，以下是在銷售的部分氨基酸產(chǎn)品目錄：L-脯氨酸叔丁基酯, CAS 2812-46-6,H-Pro-OtBuD-丙氨酸乙酯鹽酸鹽, CAS 6331-09-5,D-天門冬氨酸-β-甲酯, CAS 21394-81-0,O-叔丁基-L-絲氨酸甲酯鹽酸鹽, CAS 17114-97-5,H-Ser（tBu）-OMe.HClL-天門冬氨酸-β-芐酯, CAS 2177-63-1,L-羥脯氨酸甲酯鹽酸鹽, CAS 40216-83-9,反式-4-羥基-L-脯氨酸甲酯鹽酸鹽L-酪氨酸甲酯鹽酸鹽, CAS 3417-91-2,酪氨酸甲酯鹽酸鹽H-Tyr-OMe.HClD-天門冬氨酸二芐酯對(duì)甲苯磺酸鹽, CAS 4079-64-5,H-D-Asp（OBzl）-OBzl·TosOHD-亮氨酸甲酯鹽酸鹽, CAS 5845-53-4,vL-高苯丙氨酸乙酯鹽酸鹽, CAS 90891-21-7,（S）-（+）-2-氨基-4-苯基丁酸乙酯鹽酸鹽vL-苯甘氨酸乙酯鹽酸鹽, CAS ,L-谷氨酸雙芐酯對(duì)甲苯磺酸鹽, CAS 2791-84-6,H-Glu（OBzl）-OBzl TosOHD-高苯丙氨酸乙酯鹽酸鹽, CAS 90940-54-8,D-苯甘氨酸甲酯鹽酸鹽, CAS 19883-41-1,L-亮氨酸乙酯鹽酸鹽, CAS 2743-40-0,L-谷氨酸-α-芐酯, CAS 13030-09-6,H-Glu-OBzlL-苯丙氨酸芐酯對(duì)甲苯磺酸鹽, CAS 42584-62-6,L-丙氨酸芐酯對(duì)甲基苯磺酸鹽歡迎訂購：H-D-Aspartic acid-β-methyl esterD-天門冬氨酸-β-甲酯產(chǎn)品！

D-天門冬氨酸基本信息 MSDS 用途與合成方法 D-天門冬氨酸價(jià)格（試劑級(jí)） 上下游產(chǎn)品信息 中文名稱: D-天門冬氨酸 中文同義詞: 壞血酸;D-天冬氨酸;二胺基丁二酸;D-天門冬氨酸;D-天冬氨酸,99%;D-天門冬氨酸, D-天冬氨酸;D（-）氨基丁二酸;D（-）氨基琥珀酸 英文名稱: D-Aspartic acid 英文同義詞: H-D-ASP-OH;D-AMINOSUCCINIC ACID;D-2-AMINOBUTANEDIOIC ACID;D-ASPARAGINIC ACID;D-（-）-ASPARTIC ACID;D-ASPARTIC ACID;D-ASP;（R）-2-AMINOSUCCINIC ACID CAS號(hào): 1783-96-6 分子式: C4H7NO4 分子量: 133.1 EINECS號(hào): 217-234-6 相關(guān)類別: 氨基酸類;氨基酸;化工品;生物化工;醫(yī)藥中間體;有機(jī)酸;D系列氨基酸;氨基酸及其衍生物;生化試劑;Amino ACIDS SERIES;chiral;Amino Acid Derivatives;Aspartic acid [Asp, D];Amino Acids ａnd Derivatives;for Resolution of Bases;alpha-Amino Acids;Amino Acids;Biochemistry;Optical Resolution;Synthetic Organic Chemistry;Amino Acids;Glutamate receptor;amino acid;aspartic acid;chemicals;organic acids;pharmaceutical intermediate;Amino Acids & Derivatives;Aromatics;Intermediates & Fine Chemicals;Neurochemicals;Pharmaceuticals Mol文件: 1783-96-6.mol D-天門冬氨酸性質(zhì) 熔點(diǎn)  >300 °C（lit.）比旋光度  -25.8 º （c=5, 5N HCl） 密度  1.66 折射率  -25 ° （C=8, 50% HCl） 儲(chǔ)存條件  Store at RT. 水溶解性  SOLUBLE Merck  14,840 BRN  1723529 CAS 數(shù)據(jù)庫 1783-96-6（CAS DataBase Reference） NIST化學(xué)物質(zhì)信息 D-aspartic acid（1783-96-6）

D-天門冬氨酸 的供應(yīng)商說明：

本公司是一家專業(yè)經(jīng)營生物、儀器、試劑、耗材的公司，在廣大用戶的幫助和支持下，經(jīng)過不懈的努力，已成為國內(nèi)生命科學(xué)領(lǐng)域產(chǎn)品的主要供應(yīng)商之一，代理許多國際先進(jìn)水平的高科技產(chǎn)品，包括分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、免疫學(xué)、診斷等多個(gè)研究及應(yīng)用領(lǐng)域。公司的服務(wù)和業(yè)務(wù)網(wǎng)絡(luò)遍及全國，在同行獲得一致好評(píng)。特別是生物試劑和細(xì)胞產(chǎn)品更是種類齊全、價(jià)格實(shí)惠，美國原裝進(jìn)口原代細(xì)胞，專業(yè)培養(yǎng)基，常用傳統(tǒng)培養(yǎng)基，細(xì)胞培養(yǎng)用的相關(guān)試劑，氨基酸，抗生素，維他命類產(chǎn)品品種齊全，試劑耗材種類繁多。

D-天門冬氨酸 其它產(chǎn)品：

A0104 D-組氨酸/D-2-氨基-3-（4-咪唑基）丙酸/D-組織氨酸/D-甘噁啉-5-閃氨酸/D-甘惡啉-5-丙氨酸/D-組織氨基酸/D-Histidine BR，99% 5克 351-50-8   25克    100克    1公斤 A0105 DL-組氨酸/（±）-2-氨基-3-（4-咪唑基）丙酸/DL-2-氨基-3-（1H-咪唑-4-基）丙酸/DL-組織氨基酸/DL-Histidine BR，99% 5克 4998-57-6   25克    100克 A0105-1 DL-組氨酸鹽酸鹽/DL-氫氯組氨酸/DL-α-氨基-β-（4-咪唑基）丙酸單鹽酸鹽/DL-Histidine HCL H2O BR，99% 5克 123333-71-1   25克    100克    1公斤 A0105-2 D-組氨酸鹽酸鹽/D-氫氯組氨酸/D-α-氨基-β-（4-咪唑基）丙酸單鹽酸鹽/D-Histidine monohydrochloride monohydrate BR，99% 5克 6341-24-8A0106 L-組氨酸鹽酸鹽/鹽酸組氨酸/L-氫氯組氨酸/L-Histidine HCL BR，99% 25克 645-35-2   100克    1公斤 A0106-1 L-組氨酸鹽酸鹽一水物/鹽酸組氨酸/L-氫氯組氨酸一水物/L-Histidine HCL H2O BR，99% 25克 5934-29-2   100克    1公斤 A0107 BOC-Nim-芐基-L-組氨酸/BOC-Nim-benzyl-L-Histidine 特純，98% 5克 20898-44-6A0108 L-絲氨酸/L-蠶絲氨基酸/L-2-氨基-3-羥基丙酸/L-β-羥基丙氨酸/L-Serine BR，99% 10克 56-45-1   25克    100克    1公斤