l 本試劑盒用于體外定量檢測血清、血漿、組織、細(xì)胞上清及相關(guān)液體樣本中人抗中性粒細(xì)胞胞漿抗體(cANCA)的含量。
l 期:6個月
l 保存條件:2-8℃
l 本試劑盒僅供體外研究使用,不用于臨床診斷
實驗原理
試劑盒采用間接法酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)。往預(yù)先包被人抗中性粒細(xì)胞胞漿抗體(cANCA)捕獲抗原的包被微孔中,依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測抗體,經(jīng)過溫育并洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的人抗中性粒細(xì)胞胞漿抗體(cANCA)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),計算樣品濃度。
樣本處理及要求
1. 血清:全血標(biāo)本請于室溫放置2小時或4℃過夜后于1000g離心20分鐘,取上清即可檢測,或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。2. 血漿:可用EDTA或肝素作為抗凝劑,標(biāo)本采集后30分鐘內(nèi)于2 - 8°C 1000g離心20分鐘,或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
3. 組織勻漿:用預(yù)冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織,去除殘留血液(勻漿中裂解的紅細(xì)胞會影響測量結(jié)果),稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對應(yīng)體積的PBS(一般按1:9的重量體積比,比如1g的組織樣品對應(yīng)9mL的PBS,具體體積可根據(jù)實驗需要適當(dāng)調(diào)整,并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑)加入玻璃勻漿器中,于冰上充分研磨。為了進(jìn)一步裂解組織細(xì)胞,可以對勻漿液進(jìn)行超聲破碎,或反復(fù)凍融。將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘,取上清檢測。
4. 細(xì)胞培養(yǎng)物上清或其它生物標(biāo)本:1000g離心20分鐘,取上清即可檢測,或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。注:標(biāo)本溶血會影響檢測結(jié)果,因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項檢測。
標(biāo)本處理
1. 本公司只對試劑盒本身負(fù)責(zé),不對因使用該試劑盒所造成的樣本消耗負(fù)責(zé),請使用者使用前充分考慮到樣本的可能使用量,預(yù)留充足的樣本。
2. 實驗前應(yīng)預(yù)測標(biāo)本含量,如果標(biāo)本濃度過高,應(yīng)對標(biāo)本進(jìn)行稀釋,使稀釋后的標(biāo)本符合試劑盒的檢測范圍,計算時再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。標(biāo)本使用0.01mol/L的PBS稀釋(PH=7.0-7.2)。
3. 若所檢樣本不包含在說明書所列樣本之中,建議進(jìn)行預(yù)實驗驗證其性,并注意留存樣本。
4. 使用化學(xué)裂解液制備的組織勻漿或細(xì)胞提取液可能會由于某些化學(xué)物質(zhì)的引入導(dǎo)致ELISA實驗結(jié)果偏差。
5. 若樣本為細(xì)胞培養(yǎng)上清,因該類樣本干擾因素較多,如:細(xì)胞狀態(tài)、細(xì)胞數(shù)量、采樣時間等,所以可能存在檢測不出的情況。
6. 某些天然蛋白或重組蛋白,包括原核及真核重組蛋白,可能因為與本產(chǎn)品所使用的檢測抗體及捕獲抗體不匹配,而不被檢測出。
7. 建議使用新鮮樣本,保存時間過長可能會存在蛋白降解或變性導(dǎo)致實驗結(jié)果偏差。
需要而未提供的試劑和器材
1. 酶標(biāo)儀(450nm)
2. 高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3. 37℃恒溫箱
4. 蒸餾水或去離子水
試劑盒組成
名稱 | 96孔配置 | 48孔配置 | 備注 |
微孔酶標(biāo)板 | 8孔×12條 | 8孔×6條 | 無 |
標(biāo)準(zhǔn)品 | 0.3mL*6管 | 0.3mL*6管 | 無 |
樣本稀釋液 | 6mL | 3mL | 無 |
檢測抗體-HRP | 10mL | 5mL | 無 |
20×洗滌緩沖液 | 25mL | 15mL | 按說明書進(jìn)行稀釋 |
底物A | 6mL | 3mL | 無 |
底物B | 6mL | 3mL | 無 |
終止液 | 6mL | 3mL | 無 |
封板膜 | 2張 | 2張 | 無 |
說明書 | 1份 | 1份 | 無 |
自封袋 | 1個 | 1個 | 無 |
備注:
1. 標(biāo)準(zhǔn)品濃度依次為:8、4、2、1、0.5、0 ng/mL
2. 經(jīng)過大量正常標(biāo)本檢驗,標(biāo)本的正常濃度值均在試劑盒提供的檢測范圍內(nèi),實驗過程中直接取50μL樣本上樣即可。當(dāng)有部分樣本值超過最大標(biāo)準(zhǔn)品濃度時,可用樣本稀釋液將標(biāo)本進(jìn)行適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行實驗。
注意事項
1. 嚴(yán)格按照規(guī)定的時間和溫度進(jìn)行溫育以結(jié)果。所有試劑都必須在使用前達(dá)到室溫20-25℃。使用后立即冷藏保存試劑。
2. 洗板不正確可以導(dǎo)致不的結(jié)果。在加入底物前確保盡量吸干孔內(nèi)液體。溫育過程中不要讓微孔干燥掉。
3. 消除板底殘留的液體和手指印,否則影響OD值。
4. 底物顯色液應(yīng)呈無色或很淺的顏色,已經(jīng)變藍(lán)的底物液不能使用。
5. 避免試劑和標(biāo)本的交叉污染以免造成錯誤結(jié)果。
6. 在儲存和溫育時避免強光直接照射。
7. 平衡至室溫后再打開密封袋以防水滴凝聚在冷板條上。
8. 任何反應(yīng)試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發(fā)的強烈氣體。任何漂白成分都會破壞試劑盒中反應(yīng)試劑的生物活性。
9. 不能使用過期產(chǎn)品。
10. 如果可能傳播疾病,所有的樣品都應(yīng)管理好,按照規(guī)定的程序處理樣品和檢測裝置。
試劑準(zhǔn)備
試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡后方可使用。
20×洗滌緩沖液的稀釋:蒸餾水按1:20稀釋,即1份20×洗滌緩沖液加19份蒸餾水。
操作步驟
1. 從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2. 設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL;
3. 樣本孔中加入待測樣本50μL;空白孔不加。
4. 除空白孔外,標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應(yīng)孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5. 棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液(350μL),靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板5次(也可用洗板機(jī)洗板)。
6. 每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
7. 每孔加入終止液50μL,15min內(nèi),在450nm波長處測定各孔的OD值。
實驗結(jié)果計算
以所測標(biāo)準(zhǔn)品的OD值為橫坐標(biāo),標(biāo)準(zhǔn)品的濃度值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上或用相關(guān)軟件繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,并得到直線回歸方程,將樣品的OD值代入方程,計算出樣品的濃度。
試劑盒性能
1. 檢測范圍:0.25 ng/mL – 8 ng/mL。
2. 靈敏度:檢測濃度小于0.1 ng/mL。
3. 特異性:不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。
4. 重復(fù)性:板內(nèi)變異系數(shù)小于10% ,板間變異系數(shù)小于15% 。
說明
1. 由于現(xiàn)有條件及科學(xué)技術(shù)水平尚不能對所有供貨商提供的所有原料進(jìn)行的鑒定與分析,本產(chǎn)品可能存在一定的質(zhì)量技術(shù)風(fēng)險。
2. 最終的實驗結(jié)果與試劑的性、實驗者的相關(guān)操作以及當(dāng)時的實驗環(huán)境密切相關(guān),請務(wù)必準(zhǔn)備充足的標(biāo)本備份。
3. 不同批次的同一產(chǎn)品可能會有少許差別,如:檢測限、靈敏度以及顯色時間等,請依據(jù)試劑盒內(nèi)說明書進(jìn)行實驗操作,網(wǎng)站電子版說明書僅作參考。
4. 只有全部使用本試劑盒配套試劑才能檢測效果,不能混用其他制造商的產(chǎn)品。只有嚴(yán)格遵守本試劑盒的實驗說明才會得到的檢測結(jié)果。
問題解答
若實驗效果不好,請及時對顯色結(jié)果拍照,保留所用板條及未使用試劑,并妥善保存,然后聯(lián)系我公司技術(shù)支持為您解決問題。同時您也可以參考以下資料:
問題 | 可能原因 | 解決方案 |
標(biāo)準(zhǔn)曲線差 | 吸取及洗滌不充分 | 充分的吸取及洗滌 |
移液不精確 | 檢查和校正移液器 | |
精密度低 | 洗滌不充分 | 按說明書要求充分洗滌和浸泡 |
混勻不充分和吸取試劑不足 | 充分混勻和吸取試劑 | |
重復(fù)利用吸頭、容器和覆膜 | 使用加樣器要更換新的吸頭、使用新的容器和覆膜 | |
加樣不精確 | 檢查和校正移液器 | |
O.D值低 | 每孔加的試劑量不精確 | 校正移液器,精確加入試劑 |
溫育時間不正確 | 充足的溫育時間 | |
溫育溫度不正確 | 試劑要平衡至室溫并的溫育溫度 | |
酶標(biāo)記物或底物失效 | 通過混合酶標(biāo)記物和底物,顏色應(yīng)迅速顯現(xiàn)來檢查 | |
沒有加入終止液 | 按照說明書實驗操作步驟加入終止液 | |
超出讀數(shù)時間讀數(shù) | 在說明書推薦的讀數(shù)時間內(nèi)讀數(shù) | |
樣本值 | 不正確的樣本儲存方式 | 正確儲存樣本,使用新鮮樣本進(jìn)行實驗 |
不正確的樣本收集和處理方法 | 采取正確的樣本收集和處理方法 | |
待測物質(zhì)在樣本中含量低 | 使用新鮮樣本,重復(fù)實驗 |
產(chǎn)品名稱:大鼠elisa試劑盒
產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T
檢測方法: ELISA酶聯(lián)免疫法
說 明 書:隨貨發(fā)送,也可直接聯(lián)系在線銷售索取
測試種屬:人、大小鼠、豚鼠、兔子、牛、羊、豬、雞、鴨elisa試劑盒等種屬
檢測目的:用于測定血清,血漿及相關(guān)液體等樣本。例如適合檢測包括血清、血漿、尿液、胸腹水、灌洗液、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清、組織勻漿等標(biāo)本。
試劑盒保存及有效期:2-8℃,避光保存:6個月。
產(chǎn)品產(chǎn)地:進(jìn)口/國產(chǎn)
產(chǎn)品庫存:
品牌:自主研發(fā)/進(jìn)口原裝
產(chǎn)品價格:價格優(yōu)惠,歡迎來電洽談!
試劑盒使用范圍:僅供科研檢測,不得用于臨床.
產(chǎn)品價格:價格優(yōu)惠,歡迎來電洽談!
人腸脂肪酸結(jié)合蛋白(iFABP)ELISA試劑盒定性定量檢測一步到位,可同時大批量完成多種屬的檢測工作,而且一天之內(nèi)可以檢查幾百甚至上千份標(biāo)本,正規(guī)專業(yè)的我們,一定能幫您,將實驗做得更好,更精確。試驗過程中,如有任何疑問都可和我們聯(lián)系,無論是售前、售中、售后我們都將始終如一,將優(yōu)質(zhì)服務(wù)進(jìn)行到底。
供應(yīng)商:上海繁旌生物科技有限公司
上海繁旌生物ELISA試劑盒獨特優(yōu)勢:
1、采用全進(jìn)口原料和抗體:高效、靈敏、特異,嚴(yán)格引進(jìn)國際技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行批量生產(chǎn)。
2、先進(jìn)的優(yōu)化方案:重復(fù)性高,可靠性。
3、技術(shù)服務(wù):專業(yè),及時,耐心。
4、現(xiàn)貨供應(yīng):江浙滬隔天到貨,外地3-5天到貨。
人腸脂肪酸結(jié)合蛋白(iFABP)ELISA試劑盒技術(shù)原理:
(1). 抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記。
(2). 結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性。
(3). 酶標(biāo)記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性,又保留酶的活性。
(4). 受檢標(biāo)本與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。再加入酶標(biāo)記的抗原或抗體,也通過反應(yīng)而結(jié)合在固相載體上。
(5). 此時固相上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。
(6). 加入酶反應(yīng)的底物后,底物被酶催化成為有色產(chǎn)物,產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān),故可根據(jù)呈色的深淺進(jìn)行定性或定量分析。測定方法具有很高的敏感度(pg-ng/ml水平),并且重復(fù)性好。以免疫學(xué)反應(yīng)為基礎(chǔ),將抗原、抗體的特異性反應(yīng)與酶對底物的高效催化作用相結(jié)合起來的一種敏感性很高的試驗技術(shù)。
人腸脂肪酸結(jié)合蛋白(iFABP)ELISA試劑盒操作步驟:
1、包被過程(注意設(shè)置空白對照,陰性對照):
將所用抗原用包被稀釋液稀釋到適當(dāng)濃度(一般所需抗原包被量為每孔20-200μg),每孔抗原加入100μl,置37℃,4h,或4℃,24h;棄去孔中液體.(為避免蒸發(fā),板上應(yīng)加蓋或?qū)迤椒旁诘撞坑袧窦啿嫉慕饘贊窈兄?/span>)
2、封閉酶標(biāo)反應(yīng)孔:
5%小牛血清置37℃封閉40min.封閉時將封閉液加滿各反應(yīng)孔,并去除各孔中的氣泡,封閉結(jié)束后用洗滌液滿孔洗滌3遍,每遍3min.
洗滌方法:吸干孔內(nèi)反應(yīng)液,將洗滌液注滿板孔,放置2min略作搖動,吸干孔內(nèi)液,傾去液體后在吸水紙上拍干
洗滌次數(shù)3次
3、加入待檢測樣品(建立合適的濃度梯度):
檢測時一般采用1:50-1:400的稀釋度,應(yīng)采用較大稀釋體積進(jìn)行,一般保證樣品吸取量>20μl.
將稀釋好的樣品加入酶標(biāo)反應(yīng)孔中,每樣品至少加雙孔,每孔100μl,置于37℃,40-60min.用洗滌液滿孔洗滌3遍,每遍3min.
4、加入酶標(biāo)抗體:
酶標(biāo)抗體:根據(jù)酶結(jié)合物提供商提供的參考工作稀釋度進(jìn)行.37℃,30-60min之間.短于30min往往結(jié)果不穩(wěn)定.每孔加100μl.洗滌同前.
5、加入底物液(現(xiàn)用現(xiàn)配):
首選TMB-過氧化氫尿素溶液,OPD-過氧化氫底物液系統(tǒng)次之.
底物加入量:每孔100μl,置37℃避光放置3-5分鐘,加入終止液顯色.
6、終止反應(yīng):
每孔加入終止液50μl終止反應(yīng),于20min內(nèi)測定實驗結(jié)果.
7、結(jié)果判斷:
OPD顯色后采用492nm波長,TMB反應(yīng)產(chǎn)物檢測需要450nm波長.檢測時一定要首先進(jìn)行空白孔系統(tǒng)調(diào)零.用測定標(biāo)本孔的吸收值與一組陰性標(biāo)本測定孔平均值的比值(P/N)表示,當(dāng)P/N大于2時作為抗體的效價.(數(shù)值的大小依具體檢測要求而定.)
人腸脂肪酸結(jié)合蛋白(iFABP)ELISA試劑盒經(jīng)過嚴(yán)格交叉反應(yīng)和干擾測試及穩(wěn)定性試驗;明確的敏感度;針對所有樣品類型達(dá)到的性能;廣泛的檢測范圍可以滿足大多數(shù)檢測要求;完善的售后服務(wù)和免費的技術(shù)支持免去您的后顧之憂,凡購買試劑盒者都可享受我公司相應(yīng)折扣優(yōu)惠,如有需要,可來電咨詢購買!
關(guān)于ELISA試劑盒
ELISA試劑盒在國內(nèi)有許多種叫法,例如:ELISA檢測試劑盒、ELISA Kit、酶聯(lián)免疫試劑盒、酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒、酶聯(lián)免疫分析試劑盒、酶免試劑盒等,比較常見的叫法是ELISA檢測試劑盒、酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒等。
ELISA試劑盒自從60-70年代問世以來,得到全世界科研工作者的認(rèn)可及推崇,在歐美及中國獲得很大的推廣,尤其是國內(nèi)生化領(lǐng)域的長足發(fā)展。
Elisa生物試驗是一種敏感性高,特異性強,重復(fù)性好的實驗診斷方法。由于其試劑穩(wěn)定、易保存,操作簡便,結(jié)果判斷較客觀等因素,已廣泛應(yīng)用在免疫學(xué)檢驗的各領(lǐng)域中。ELISA檢測試劑盒適用于體外定性檢測人血清或血漿中的抗人類戊型肝炎(HEV)病毒 IgM 抗體ELISA檢測。
免疫測定技術(shù)的基礎(chǔ)在于抗原抗體之間的特異結(jié)合反應(yīng),所以任何優(yōu)質(zhì)的診斷試劑離不開優(yōu)質(zhì)的原料,如抗原抗體,酶等。以前用于免疫測定的抗原通常為各種純化抗原,而抗體則為純化抗原免疫動物后獲得的多克隆抗體和使用雜交瘤技術(shù)得到的單克隆抗體,而抗原或抗體的標(biāo)記物如酶標(biāo)結(jié)合物則通過各種化學(xué)合成方法制備。近年來,隨著分子生物學(xué)的發(fā)展,使用基因工程方法制備各種特殊的抗原或抗體及其酶結(jié)合物等免疫測定試劑幾成為現(xiàn)實的新一代試劑,各種新型使用的測定方法也不斷出現(xiàn)。
HBsAg試劑特點(檢測模式:臨床抗體夾心法):包被抗體為山羊多抗。多抗具有高親和性和對抗原各種表位的反應(yīng)性。酶表抗體為與HBsAg有不同結(jié)合位點的鼠復(fù)合單位,可測得HBsAg變異樣品,提高檢測的特異性(99.98%)提高檢測的靈敏度,應(yīng)用Parl Ehrich 學(xué)說(PEI)HBsAg標(biāo)準(zhǔn)品,對ad標(biāo)準(zhǔn)品的靈敏度為0.05ng/ml對ay標(biāo)準(zhǔn)品靈敏度為0.025ng/ml
ELISA檢測試劑盒應(yīng)用定性夾心免疫檢測技術(shù),用合成的HEV多肽抗原包被微孔板板條,這些多肽是中國型HEV毒株核心氨基酸序列中抗原性很強的肽段,分別來自于該毒株的開放閱讀框2和開放閱讀框3。將樣品或標(biāo)準(zhǔn)品加入孔中并孵育,如果其中存在HEV IgM抗體,這些抗體就會與HEV 的多肽抗原結(jié)合,并固定在上面,洗板除去其它非特異性抗體和樣品中的其它成份。然后加入羊抗人IgM-HRP(辣根過氧化物酶)酶結(jié)合物,經(jīng)第二次孵育后,酶結(jié)合物就會與第一次孵育結(jié)合上的HEV IgM抗體相結(jié)合,洗板除去未結(jié)合的酶結(jié)合物,加入TMB底物溶液,在第三次孵育時會發(fā)生酶-底物反應(yīng),只有那些含有HEV IgM抗體和酶結(jié)合物所形成的復(fù)合物的孔才會發(fā)生顏色變化,加入硫酸溶液終止酶和底物間的反應(yīng),并在波長: 450nm處測量O.D.值,按照本HEV IgM抗體elisa試劑盒的測試標(biāo)準(zhǔn), O.D.值大于或等于Cut-Off值的樣品被認(rèn)為是初試陽性。
LISA的基礎(chǔ)是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記。結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性,酶標(biāo)記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性,又保留酶的活性。在測定時,受檢標(biāo)本(測定其中的抗體或抗原)與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與液體中的其他物質(zhì)分開。再加入酶標(biāo)記的抗原或抗體,也通過反應(yīng)而結(jié)合在固相載體上。此時固相上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。加入酶反應(yīng)的底物后,底物被酶催化成為有色產(chǎn)物,產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān),故可根據(jù)呈色的深淺進(jìn)行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高,間接地放大了免疫反應(yīng)的結(jié)果,使測定方法達(dá)到很高的敏感度。 ELISA可用于測定抗原,也可用于測定抗體。
然而,影響Elisa試驗結(jié)果的因素很多,故加強各個環(huán)節(jié)的質(zhì)量保證才能充分發(fā)揮其方法學(xué)的優(yōu)點。
特點:一、高效、靈敏、特異的抗體; 二、穩(wěn)定的重復(fù)性和可靠性; 三、吸附性能好,空白值低,孔底透明度高的固相載體; 四、適用血清、血漿、組織勻漿液、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、尿液等等多種標(biāo)本類型; 五、節(jié)省實驗經(jīng)費。
elisa試劑盒回收率是反應(yīng)待測物在樣品分析過程中的損失的程度,損失越少,回收率越高,如果作標(biāo)液1PPM,就是1毫克/升,而作出標(biāo)準(zhǔn)數(shù)據(jù)為0.99毫克/升,就是說你的回收率是99%,這個與真實成分有密切的關(guān)系,說明方法的準(zhǔn)確度。比如水中總無機(jī)氯含量測定,樣品水中含有無機(jī)氯20mg/L,取100mL被測水樣品,加入0.1mL濃度為10mg/mL的含無機(jī)氯標(biāo)準(zhǔn)樣品,測定時忽略體積變化,如果測定出樣品中無機(jī)氯為2.98mg/L,則認(rèn)為回收率為99%。
安全性
1. 避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體,請盡快用水沖洗。
2. 實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。
3. 不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。
4. 試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存。
5. 實驗中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。
6. 不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
7. 使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器。
8. 使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
9. 洗滌酶標(biāo)板時應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
10. 底物A應(yīng)揮發(fā),避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實驗完成后應(yīng)立即讀取OD值。
11. 加入試劑的順序應(yīng)一致,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時間一樣。
12. 按照說明書中標(biāo)明的時間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
elisa試劑盒測試要求
做好對照
正式試驗時,應(yīng)分別以陽性對照與陰性對照控制試驗條件,待檢樣品應(yīng)作一式二份,以保證實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性。有時本底較高,說明有非特異性反應(yīng),可采用羊血清、兔血清或BSA等封閉。
實驗條件的選擇
在ELISA中,進(jìn)行各項實驗條件的選擇是很重要的,其中包括:
(1) 固相載體的選擇:許多物質(zhì)可作為固相載體,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體,在使用前均可進(jìn)行篩選:用等量抗原包被,在同一實驗條件下進(jìn)行反應(yīng),觀察其顯色反應(yīng)是否均一性,據(jù)此判明其吸附性能是否良好。
(2) 包被抗體(或抗原)的選擇:將抗體(或抗原)吸附在固相載體表面時,要求純度要好,吸附時一般要求PH在9.0~9.6之間。吸附溫度,時間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃ 18~24小時。蛋白質(zhì)包被的最適濃度需進(jìn)行滴定:即用不同的蛋白質(zhì)濃度(0.1、1.0和10μg/ml等)進(jìn)行包被后,在其它試驗條件相同時,觀察陽性標(biāo)本的OD值。選擇OD值最大而蛋白量最少的濃度。對于多數(shù)蛋白質(zhì)來說通常為1~10μg/ml。
(3) 酶標(biāo)記抗體工作濃度的選擇:首先用直接ELISA法進(jìn)行初步效價的滴定(見酶標(biāo)記抗體部份)。然后再固定其它條件或采取“方陣法”(包被物、待檢樣品的參考品及酶標(biāo)記抗體分別為不同的稀釋度)在正式實驗系統(tǒng)里準(zhǔn)確地滴定其工作濃度。
(4) 酶的底物及供氫體的選擇:對供氫體的選擇要求是價廉、安全、有明顯地顯色反應(yīng),而本身無色。有些供氫體(如OPD等)有潛在的致癌作用,應(yīng)注意防護(hù)。有條件者應(yīng)使用不致癌、靈敏度高的供氫體,如TMB和ABTS是目前較為滿意的供氫體。底物作用一段時間后,應(yīng)加入強酸或強堿以終止反應(yīng)。通常底物作用時間,以10-30分鐘為宜。底物使用液必須新鮮配制,尤其是H2O2在臨用前加入。
檢測范圍和靈敏度不同,用量少時,可使用分裝,前期是它的長久性不是很好。
試劑盒的標(biāo)準(zhǔn)曲線最高點OD 值均在2.0±0.2,零孔的OD 值都控制在0.10以下。
試劑盒的標(biāo)準(zhǔn)曲線相關(guān)系數(shù)R≥0.98。
試劑盒重復(fù)性好,板內(nèi)、板間變異系數(shù)均<9 %。
試劑的組份都多給20%的富余量,確保完成48/96孔的檢測,避免分次檢測可能造成試劑量不足的情況。
檢測抗體及酶結(jié)合物的稀釋度合適(均為1:30), 方便試驗操作者準(zhǔn)確地做稀釋工作,保證實驗結(jié)果的重復(fù)性
ELISA法是免疫診斷中的一項新技術(shù),現(xiàn)已成功地應(yīng)用于多種病原微生物所引起的傳染病、寄生蟲病及非傳染病等方面的免疫診斷。也已應(yīng)用于大分子抗原和小分子抗原的定量測定,根據(jù)已經(jīng)使用的結(jié)果,認(rèn)為ELISA法具有靈敏、特異、簡單、快速、穩(wěn)定及易于自動化操作等特點。不僅適用于臨床標(biāo)本的檢查,而且由于一天之內(nèi)可以檢查幾百甚至上千份標(biāo)本,因此,也適合于血清流行病學(xué)調(diào)查。本法不僅可以用來測定抗體,而且也可用于測定體液中的循環(huán)抗原,所以也是一種早期診斷的良好方法。因此ELISA法在生物醫(yī)學(xué)各領(lǐng)域的應(yīng)用范圍日益擴(kuò)大
產(chǎn)品名稱:人腫瘤壞死因子α(TNF-α)elisa試劑盒英文名稱:
Human Tumor necrosis factor α,TNF-α ELISA KIT |
人腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體4(TRAIL-R4)ELISA試劑盒 |
人腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體3(TRAIL-R3)ELISA試劑盒 |
人腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體1(TRAIL-R1)ELISA試劑盒 |
人腫瘤壞死因子β(TNF-β)ELISA試劑盒 |
人腫瘤壞死因子可溶性受體Ⅱ(TNFsR-Ⅱ)ELISA試劑盒 |
人腫瘤壞死因子可溶性受體Ⅰ(TNFsR-Ⅰ)ELISA試劑盒 |
人血管生成素1(ANG-1)elisa試劑盒是全世界科研界較認(rèn)可的檢測方式,英文名稱: Human Angiopoietin 1,ANG-1 elisa Kit,一種簡易操作,敏感性高,特異性強,重復(fù)性好的實驗診斷方法。在我 們國家的科研單位、高校、醫(yī)療實驗室都應(yīng)用的比較成熟。
人血管生成素1(ANG-1)elisa試劑盒技術(shù)流程ELISA的基礎(chǔ)是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記。結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性,酶標(biāo)記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活 性,又保留酶的活性。在測定時,受檢標(biāo)本(測定其中的抗體或抗原)與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與液體中的其他物質(zhì)分開。再加入酶標(biāo)記 的抗原或抗體,也通過反應(yīng)而結(jié)合在固相載體上。此時固相上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。加入酶反應(yīng)的底物后,底物被酶催化成為有色產(chǎn)物,產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān) ,故可根據(jù)呈色的深淺進(jìn)行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高,間接地放大了免疫反應(yīng)的結(jié)果,使測定方法達(dá)到很高的敏感度。 ELISA可用于測定抗原,也可用于測定抗體。然而,影響Elisa試驗結(jié)果的因素很多,故加強各個環(huán)節(jié)的質(zhì)量保證才能充分發(fā)揮其方法學(xué)的優(yōu)點。
主要優(yōu)點1、簡易操作、高效、靈敏、特異的抗體;2、穩(wěn)定的重復(fù)性和可靠性;3、吸附性能好,空白值低,孔底透明度高的固相載體;4、適用血清、血漿、組織勻漿液、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、尿液等等多種標(biāo)本類型;5、節(jié)省實驗經(jīng)費。
使用方法1、 血清:操作過程中避免任何細(xì)胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后,1000×g離心10分鐘將血紅細(xì)胞迅速小心地分離。2、 血漿:EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。3、 細(xì)胞上清液:1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。4、 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘,取上清液。5、 保存:如果樣品不立即使用,應(yīng)將其分成小部分-70℃保存,避免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng) 在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。操作步驟1:雙抗體夾心法1.包被:用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1~10μg/ml。在每個聚苯乙烯板的反應(yīng)孔中加0.1ml,4℃ 過夜。次日,棄去孔內(nèi)溶液,用洗滌緩沖液洗3次,每次3分鐘。(簡稱洗 滌,下同)。2. 加樣:加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃ 孵育1小時。然后洗滌。(同時做空白孔,陰性對照孔及陽性對照孔)。3. 加酶標(biāo)抗體:于各反應(yīng)孔中,加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.1ml。37℃ 孵育0.5~1小時,洗滌。4. 加底物液顯色:于各反應(yīng)孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分鐘。5. 終止反應(yīng):于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml。6. 結(jié)果判定:可于白色背景上,直接用肉眼觀察結(jié)果:反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深,陽性程度越強,陰性反應(yīng)為無色或極淺,依據(jù)所呈顏色的深淺,以“+”、“-”號表示。也可測OD值:在ELISA檢測儀上,于 450nm(若以ABTS顯色,則410nm)處,以空白對照孔調(diào)零后測各孔OD值,若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍,即為陽性。操作步驟2:間接法1.用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1~10μg/ml,每孔加0.1ml,4℃過夜;2.次日洗滌3次;3.加一定稀釋的待檢樣品(未知抗體)0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時,洗滌;4.(同時做空白、陰性及陽性孔對照)于反應(yīng)孔中,加入新鮮稀釋的酶標(biāo)第二抗體(抗抗體)0.1ml;5.37℃孵育30-60分鐘,洗滌;6.’最后一遍用DDW洗滌。其余步驟同“雙抗體夾心法”的4、5、6。
標(biāo)本要求1.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實驗。若不能馬上進(jìn)行試驗,可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融2.不能檢測含NaN3 的樣品,因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
注意事項1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30 分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。2.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間最好控制在5 分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。4. 請每次測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線,最好做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD 值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔第一孔的OD 值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n 倍)后再測定,計算時請最后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。6.底物請避光保存。7.嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行,試驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。9.本試劑不同批號組分不得混用。10.保存條件及有效期:1.試劑盒保存:;2-8℃。2.有效期:6 個月
【規(guī)格】48T/96T
【所需標(biāo)本】血清、血漿、細(xì)胞上清液、尿液、體液、灌洗液、腦脊髓、心房水、胸房水、組織等.
【庫存狀態(tài)】現(xiàn)貨供應(yīng),訂單生成,立即安排發(fā)貨。
【使用范圍】僅供科研使用,不得用于臨床。
【產(chǎn)品用途】用于測定人血清、血漿、組織及相關(guān)液體樣本中的含量或活性。
上海潤裕生物-中國老牌ELISA試劑盒供應(yīng)商,免費代測,從標(biāo)本收集、保存、預(yù)試驗、實驗、數(shù)據(jù)分析等全實驗過程提供完整的技術(shù)指導(dǎo)。
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人Smad同源物3(Smad3)elisa試劑盒廠家組成:
試劑盒組成 48孔配置 96孔配置 保存
說明書 1份 1份
封板膜 2片(48) 2片(96)
密封袋 1個 1個
酶標(biāo)包被板 1×48 1×96 2-8℃保存
標(biāo)準(zhǔn)品 0.5ml×1瓶 0.5ml×1瓶 2-8℃保存
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 3ml×1瓶 6ml×1瓶 2-8℃保存
鏈霉親和素-HRP 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存
生物素標(biāo)記抗體 0.5ml×1瓶 1 ml×1瓶 2-8℃保存
顯色劑A液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存
顯色劑B液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存
終止液 3ml×1瓶 6ml×1瓶 2-8℃保存
濃縮洗滌液 (20ml×20倍)×1瓶 (20ml×30倍)×1瓶 2-8℃保存
人Smad同源物3(Smad3)elisa試劑盒廠家樣品收集、處理及保存方法:
1)血清-----操作過程中避免任何細(xì)胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后,1000×g離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2)血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
3)細(xì)胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
4)組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘,取上清液
5)保存------如果樣品不立即使用,應(yīng)將其分成小部分-70 ℃保存,避免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
人Smad同源物3(Smad3)elisa試劑盒廠家我司ELISA試劑盒采用原裝進(jìn)口抗體,高品質(zhì)Elisa試劑盒,專業(yè)的Elisa試劑盒廠家,品質(zhì)保證,免費代測。其他相關(guān)產(chǎn)品歡迎選購:
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大鼠熱休克蛋白27(HSP-27)ELISA檢測試劑盒 本試劑僅供研究使用,如需詳細(xì)資料請來電咨詢北京華耐特生物科技有限公司。
本試劑盒僅供研究使用 有效期:6 個月1. 試劑盒保存:-20℃(較長時間不用時);2-8℃(頻繁使用時)。2. 濃洗滌液低溫保存會有鹽析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶。3. 中、英文說明書可能會有不一致之處,請以英文說明書為準(zhǔn)。4. 剛開啟的酶聯(lián)板孔中可能會含有少許水樣物質(zhì),此為正常現(xiàn)象,不會對實驗結(jié)果造成任何影響。5. 所有的樣品都應(yīng)管理好,按照規(guī)定的程序處理樣品和檢測裝置。
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Elisa試劑盒的原理 ELISA是以免疫學(xué)反應(yīng)為基礎(chǔ),將抗原、牽9體的特異性反應(yīng)與酶對底物的高效催化作用相結(jié)合起來的一種敏感性很高的試驗技術(shù)。由于抗原、抗體的反應(yīng)在一種固相載體──聚苯乙烯微量滴定板的孔中進(jìn)行,每加入一種試劑孵育后,可通過洗滌除去多余的游離反應(yīng)物,從而保證試驗結(jié)果的特異性與穩(wěn)定性。在實際應(yīng)用中,通過不同的設(shè)計,具體的方法步驟可有多種。即:用于檢測抗體的間接法(圖a)、用于檢測抗原的雙抗體夾心法(圖b)以及用于檢測小分子抗原或半抗原的抗原競爭法等等。比較常用的是ELISA雙抗體夾心法及ELISA間接法。
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