人吡啶酚(PYD)elisa試劑盒參數(shù):
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F3795-A | 人吡啶酚(PYD)elisa試劑盒 | Human Pyridinoline,PYD elisa Kit | 48T |
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F3795-A | 人吡啶酚(PYD)elisa試劑盒 | Human Pyridinoline,PYD elisa Kit | 48T |
人吡啶酚(PYD)elisa試劑盒廣泛應(yīng)用在免疫學(xué)檢驗(yàn)的各領(lǐng)域中,我們來(lái)介紹一下更簡(jiǎn)便的操作說(shuō)明,編號(hào):F3795-A,英文名稱(chēng)Human Pyridinoline,PYD elisa Kit
1、人吡啶酚(PYD)elisa試劑盒操作方法一用于檢測(cè)未知抗原的雙抗體夾心法:(1).包被:用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1~10μg/ml。在每個(gè)聚苯乙烯板的反應(yīng)孔中加0.1ml,4℃ 過(guò)夜。次日,棄去孔內(nèi)溶液,用洗滌緩沖液洗3次,每次3分鐘。(簡(jiǎn)稱(chēng)洗滌,下同)。 (2).加樣:加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃ 孵育1小時(shí)。然后洗滌。(同時(shí)做空白孔,陰性對(duì)照孔及陽(yáng)性對(duì)照孔)。 (3).加酶標(biāo)抗體:于各反應(yīng)孔中,加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.1ml。37℃ 孵育0.5~1小時(shí),洗滌。 (4).加底物液顯色:于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分鐘。 (5).終止反應(yīng):于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml。 (6).結(jié)果判定:可于白色背景上,直接用肉眼觀察結(jié)果:反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深,陽(yáng)性程度越強(qiáng),陰性反應(yīng)為無(wú)色或極淺,依據(jù)所呈顏色的深淺,以“+”、“-”號(hào)表示。也可測(cè)OD值:在ELISA檢測(cè)儀上,于450nm(若以ABTS顯色,則410nm)處,以空白對(duì)照孔調(diào)零后測(cè)各孔OD值,若大于規(guī)定的陰性對(duì)照OD值的2.1倍,即為陽(yáng)性。
2、人吡啶酚(PYD)elisa試劑盒操作方法二:用于檢測(cè)未知抗體的間接法: (1).用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1~10μg/ml,每孔加0.1ml,4℃過(guò)夜。次日洗滌3次。 (2).加一定稀釋的待檢樣品(未知抗體)0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時(shí),洗滌。(同時(shí)做空白、陰性及陽(yáng)性孔對(duì)照)(3).于反應(yīng)孔中,加入新鮮稀釋的酶標(biāo)第二抗體(抗抗體)0.1ml,37℃孵育30-60分鐘,洗滌,最后一遍用DDW洗滌。 (4).于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分鐘 (5).于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml (6).可于白色背景上,直接用肉眼觀察結(jié)果:反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深,陽(yáng)性程度越強(qiáng),陰性反應(yīng)為無(wú)色或極淺,依據(jù)所呈顏色的深淺,以“+”、“-”號(hào)表示。也可測(cè)OD值:在ELISA檢測(cè)儀上,于450nm(若以ABTS顯色,則410nm)處,以空白對(duì)照孔調(diào)零后測(cè)各孔OD值,若大于規(guī)定的陰性對(duì)照OD值的2.1倍,即為陽(yáng)性。 ELISA是一種敏感性高、特異性強(qiáng)、重復(fù)性好的實(shí)驗(yàn)診斷方法,由于其試劑穩(wěn)定、易保存、操作簡(jiǎn)便、結(jié)果判斷較客觀等因素,以及既適宜于大規(guī)模篩查試驗(yàn)又可以用于少量標(biāo)本的檢測(cè),既可以做定性試驗(yàn)也可以做定量分析等優(yōu)點(diǎn),已廣泛應(yīng)用于微生物學(xué)、寄生蟲(chóng)學(xué)、腫瘤學(xué)和細(xì)胞因子等領(lǐng)域。
3、臨床標(biāo)本的收集和保存 用于ELISA測(cè)定的臨床標(biāo)本最為常用的是血清(漿),有時(shí)因?yàn)樘囟ǖ臋z測(cè)目的,也用到唾液、腦脊液、尿液、糞便等標(biāo)本。目前臨床上使用血清標(biāo)本測(cè)定的標(biāo)志物一般有傳染性病原體的抗原和抗體、腫瘤標(biāo)志物、激素、特種蛋白、細(xì)胞因子和治療藥物等。對(duì)用于激素和治療藥物測(cè)定的血清標(biāo)本的收集,要注意收集時(shí)間甚或體位有可能會(huì)對(duì)測(cè)定結(jié)果產(chǎn)生影響。如可的松在早晨4~6點(diǎn)之間,會(huì)有一峰值出現(xiàn):生長(zhǎng)激素、促黃體激素(LH)和促卵泡激素(FSH)均以陣發(fā)性方式釋放,因此,在測(cè)定此類(lèi)激素時(shí),有必要在密切相連的時(shí)間間隔內(nèi)采取數(shù)份血樣本,以其中間值為測(cè)定值。又如當(dāng)從臥位變?yōu)檎玖⑽粫r(shí),血清中腎素活性將出現(xiàn)明顯增高。再如治療藥物的檢測(cè),應(yīng)根據(jù)藥代動(dòng)力學(xué)選擇服藥后的最適時(shí)間抽血檢測(cè)。用于傳染性病原體的抗原和抗體、腫瘤標(biāo)志物和特種蛋白等的檢測(cè)的血清標(biāo)本的收集則沒(méi)有時(shí)間和體位方面的影響,只是在處理和保存方面要考慮。
(1)要注意避免出現(xiàn)嚴(yán)重溶血。血紅蛋白中含有血紅素基團(tuán),其有類(lèi)似過(guò)氧化物的活性,因此,在以HRP為標(biāo)記酶的ELISA測(cè)定中,如血清標(biāo)本中血紅蛋白濃度較高,則其就很容易在溫育過(guò)程中吸附于固相,從而與后面加入的HRP底物反應(yīng)顯色。(2)樣本的采集及血清分離中要注意盡量避免細(xì)菌污染,一則細(xì)菌的生長(zhǎng),其所分泌的一些酶可能會(huì)對(duì)抗原抗體等蛋白產(chǎn)生分解作用;二則一些細(xì)菌的內(nèi)源性酶如大腸桿菌的β-半乳糖苷酶本身會(huì)對(duì)用相應(yīng)酶作標(biāo)記的測(cè)定方法產(chǎn)生非特異性干擾。(3)血清標(biāo)本如是以無(wú)菌操作分離,則可以在2~8℃下保存一周,如為有菌操作,則建議冰凍保存。樣本的長(zhǎng)時(shí)間保存,應(yīng)在-70℃以下。(4)冰凍保存的血清標(biāo)本須注意避免因停電等造成的反復(fù)凍融。標(biāo)本的反復(fù)凍融所產(chǎn)生的機(jī)械剪切力將對(duì)標(biāo)本中的蛋白等分子產(chǎn)生破壞作用,從而引起假陰性結(jié)果。此外,凍融標(biāo)本的混勻亦應(yīng)注意,不要進(jìn)行劇烈振蕩,反復(fù)顛倒混勻即可。(5)標(biāo)本在保存中如出現(xiàn)細(xì)菌污染所致的混濁或絮狀物時(shí),應(yīng)離心沉淀后取上清檢測(cè)。
4、試劑準(zhǔn)備 在臨床實(shí)驗(yàn)室,對(duì)試劑準(zhǔn)備一般不太注意,通常的做法是,在實(shí)驗(yàn)時(shí)將試劑從冰箱中拿出來(lái)即用,而忽略了這種做法有可能影響后面溫育時(shí)間不夠的問(wèn)題,其直接的后果是對(duì)一些弱陽(yáng)性標(biāo)本的檢測(cè)出現(xiàn)假陰性。因此在ELISA測(cè)定中試劑的準(zhǔn)備最為關(guān)鍵的是,在實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前,將試劑盒先從冰箱中拿出來(lái),在室溫下放置20分鐘以上后,再進(jìn)行測(cè)定,以使試劑盒在使用前與室溫平衡。這樣做的目的,主要是為了在后面的溫育反應(yīng)步驟中,能使反應(yīng)微孔內(nèi)的溫度能較快地達(dá)到所要求的高度,以滿(mǎn)足測(cè)定要求。其次,目前的商品ELISA試劑盒中的洗板液均需在實(shí)驗(yàn)室使用時(shí)對(duì)所提供的濃縮液稀釋配制,因此稀釋時(shí)所用的蒸餾水或去離子水應(yīng)保證質(zhì)量。此外,當(dāng)試劑盒以O(shè)PD為底物時(shí),則底物溶液應(yīng)在反應(yīng)顯色前臨時(shí)配制。
三、加血清樣本及反應(yīng)試劑在現(xiàn)在的ELISA商品試劑盒中,血清樣本的加入幾乎是唯一的要使用微量加樣器加入樣本的步驟。使用微量加樣器加樣必須注意的關(guān)鍵點(diǎn)是:加樣不可太快,要避免加在孔壁上部,不可濺出和產(chǎn)生氣泡。加樣太快,無(wú)法保證微量加樣的準(zhǔn)確性和均一性。加在孔壁上部的非包被區(qū),易導(dǎo)致非特異吸附。濺出會(huì)對(duì)鄰近孔產(chǎn)生污染。出現(xiàn)氣泡則反應(yīng)液界面有差異。試劑的加入在國(guó)產(chǎn)試劑盒中基本上均是從滴瓶中滴加,除了要注意滴加的角度外,滴加的速度也很重要,滴加太快,很容易出現(xiàn)重復(fù)滴加或加在兩孔之間的現(xiàn)象,這樣就會(huì)在孔內(nèi)的非包被區(qū)出現(xiàn)非特異吸附,從而引起非特異顯色。所以,有時(shí)候一份標(biāo)本用相同的試劑盒這次測(cè)定為陽(yáng)性,下次測(cè)定為陰性,往往就是上述加樣及試劑的錯(cuò)誤所致。
四、溫育溫育是ELISA測(cè)定中影響測(cè)定成敗最為關(guān)鍵的一個(gè)因素。ELISA作為一種固相免疫測(cè)定,抗原抗體的結(jié)合反應(yīng)在固相上進(jìn)行,要使液相中的抗原或抗體與固相上的特異抗體或抗原完全結(jié)合,必須在一定的溫度條件下反應(yīng)一定的時(shí)間。溫育所需時(shí)間與溫度成反比,即溫度越高,則所需時(shí)間相對(duì)較短。最為常用的溫育溫度有37℃和室溫,其次是43℃和2~8℃。溫育這一步是臨床ELISA測(cè)定中最容易出現(xiàn)問(wèn)題的步驟。通常目前國(guó)內(nèi)ELISA商品試劑盒的反應(yīng)溫育時(shí)間為37℃ 30分鐘~1小時(shí),進(jìn)口ELISA試劑盒則通常為37℃ 1~2小時(shí)才能有較完全的結(jié)合,低于1小時(shí),可能會(huì)影響測(cè)定下限。因此,關(guān)于溫育,在實(shí)際測(cè)定操作中一定要注意以下幾點(diǎn):要保證在設(shè)定的溫度下有足夠的反應(yīng)時(shí)間。一般來(lái)說(shuō),加完樣本和/或反應(yīng)試劑后,將微孔板從室溫拿至水浴箱或溫箱中時(shí),孔內(nèi)溫度從室溫升至37℃,需要一定的時(shí)間,尤其是在室溫比較低以及非水浴的狀態(tài)下,這段升溫時(shí)間可能還比較長(zhǎng),而在臨床實(shí)驗(yàn)室中,很少有人注意這個(gè)問(wèn)題,通常是將微孔板一放入溫箱即開(kāi)始計(jì)時(shí),這樣就很容易造成實(shí)際測(cè)定中溫育時(shí)間不夠,弱陽(yáng)性樣本測(cè)不出來(lái)的問(wèn)題。曾有一地處南方的血站同行提出了一個(gè)問(wèn)題,就是在每一年的冬季總有那么一個(gè)多月的時(shí)間,在做HBsAg測(cè)定的室內(nèi)質(zhì)控中,測(cè)定由衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心供應(yīng)的1 ng/ml弱陽(yáng)性樣本時(shí),總是測(cè)不出來(lái),不知原因?yàn)楹危窟@可能就與南方冬天室內(nèi)溫度較低有關(guān),此時(shí)微孔板轉(zhuǎn)入溫箱后37℃溫育時(shí)間不夠,以致弱陽(yáng)性樣本測(cè)定為陰性。因此,為保證37℃下足夠的溫育時(shí)間,臨床實(shí)驗(yàn)室可自行確定本實(shí)驗(yàn)室不同季節(jié)(不同室溫下)微孔板從室溫拿至溫箱后需要多長(zhǎng)時(shí)間孔內(nèi)溫度才能達(dá)到37℃,從而適當(dāng)延長(zhǎng)板條在溫箱中的放置時(shí)間。具體的做法是,用一小溫度計(jì)放置板孔反應(yīng)溶液中測(cè)量觀察即可。
| 溫度 |
測(cè)量范圍 | -40℃-60℃ |
準(zhǔn)確度 | ≤±0.3℃(25℃時(shí)) |
信號(hào)輸出 | 4-20mA(線(xiàn)性對(duì)應(yīng)測(cè)量范圍) |
供電電源 | DC12-24V |
取樣電阻 | ≤500Ω(12V DC供電時(shí)≤250Ω,詳見(jiàn)接線(xiàn)說(shuō)明) |
敏感元件 | Pt100鉑電阻 |
工作溫度 | -40-60℃ |
抗浪涌電壓 | ±2000V |
存儲(chǔ)溫度 | -40-80℃(非凝結(jié)) |
線(xiàn)纜長(zhǎng)度 | 1.5m(可根據(jù)用戶(hù)要求定制) |
探頭外殼材料 | ABS工程塑料 |
百葉箱材料 | 同上 |
C7027A一體化紫外線(xiàn)型火焰探測(cè)器
品牌:Honeywell(霍尼威爾)
產(chǎn)地:美國(guó) 型號(hào)參數(shù) C7027A1023 使用環(huán)境-18°C...102°C,引線(xiàn)長(zhǎng)2.4m C7027A1031 使用環(huán)境-40°C...102°C,引線(xiàn)長(zhǎng)2.4m C7027A1049 使用環(huán)境-18°C...102°C,引線(xiàn)長(zhǎng)2.4m C7027A1064 使用環(huán)境-40°C...102°C,引線(xiàn)長(zhǎng)7.3m C7027A1072 使用環(huán)境-40°C...102°C,引線(xiàn)長(zhǎng)2.4m C7027A1080 使用環(huán)境-18°C...102°C,引線(xiàn)長(zhǎng)2.4m 美國(guó)HONEYWELL霍尼威爾電眼: C7015A1076,C7015A1092,C7015A1126,C7027A1023,C7035A1064,C7035A1023,C7035A1031,C7035A1056,C7035A1080,C7012A1160,C7012A1186,C7012A1194,C7012C1142,C7012E1161,C7012E1278,C7012F1052,C7027A1031,C7027A1049,C7027A1064,C7027A1072,C7027A1080,C7061A1012,C7061A1038,C7061F2001,C7012A1145,C7012A1152,C7012E1104,C7012E1112,C7012E1120,C7012E1146,C7012E1153
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