溫州瑞昕儀器有限公司
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綿羊己糖激酶 (HK)酶聯(lián)免疫分析(ELISA)
試劑盒使用說明書
本試劑僅供研究使用 目的:本試劑盒用于測定綿羊血清,細胞上清及相關液體樣本中己糖激酶 (HK)的活性。
實驗原理:
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中綿羊己糖激酶(HK)水平。用純化的綿羊己糖激酶(HK)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入己糖激酶(HK),再與HRP標記的己糖激酶(HK)抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經(jīng)過洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的己糖激酶(HK)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中綿羊己糖激酶(HK)濃度。
試劑盒組成:
(20ml×20倍)×1瓶 |
樣本處理及要求:
1. 血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清,保存過程中如出現(xiàn)沉淀,應再次離心。
2. 血漿:應根據(jù)標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應該再次離心。
3. 尿液:用無菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。
4. 細胞培養(yǎng)上清:檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。檢測細胞內的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融,以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
5. 組織標本:切割標本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆。標本融化后仍然保?/span>2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。
6. 標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融.
7. 不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
操作步驟
1. 標準品的稀釋與加樣:在酶標包被板上設標準品孔10孔,在、第二孔中分別加標準品100μl,然后在、第二孔中加標準品稀釋液50μl,混勻;然后從孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,再各取50μl分別加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為50μl,濃度分別為480mU/L,320mU/L ,160mU/L,80mU/L,40mU/L)。
2. 加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品最終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4. 配液:將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T的20倍)倍稀釋后備用。
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。
7. 溫育:操作同3。
8. 洗滌:操作同5。
9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。
11. 測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。
注意事項:
1. 試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。
2. 濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。
3. 各步加樣均應使用加樣器,并經(jīng)常校對其性,以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內,如標本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。
4. 請每次測定的同時做標準曲線,做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本OD值大于標準品孔孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,計算時請乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。
5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6. 底物請避光保存。
7. 嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.
8. 所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
9. 本試劑不同批號組分不得混用。
10. 如與英文說明書有異,以英文說明書為準。
計算:
以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,
在坐標紙上繪出標準曲線,根據(jù)樣品的OD
值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋
倍數(shù);或用標準物的濃度與OD值計算出標
準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值
代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋
倍數(shù),即為樣品的實際濃度。
(此圖僅供參考)
試劑盒性能:
1.樣品線性回歸與預期濃度相關系數(shù)R值為0.92以上。
2.批內與批見應分別小于9%和15%
檢測范圍:
20mU/L -580mU/L
保存條件及期:
1.試劑盒保存:;2-8℃。
2.期:6個月
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好富頓Houghto-Quench F2000淬火油
快速光潔淬火油
| 性能指標 | 應用說明 | |||
粘度(mm2/s)(40℃) | 使用溫度℃ | 最大冷速典型值(IVF儀60℃)℃/s | |||
Houghto-Quench K | 13-22 | 40-80 | 100 | 適用于低淬透性工件或厚大截面尺寸的工件淬火,可用于大模數(shù)(12-14)齒輪的淬火。 | |
Houghto-Quench K-1050 | 12-21 | 40~80 | 95 | 適用于低淬透性工件或厚大截面尺寸的工件淬火,可用于10個模數(shù)以下齒輪的淬火。 | |
Houghto-Quench K-2000 |
8-14 |
40~80 |
105 | 為K系列中冷卻速度最快的淬火油之一?捎糜诖竽(shù)(12-16)齒輪的淬火。油質透明。 | |
Houghto-Quench G | 14-22 | 40~80 | 90 | 適用于各種中低淬透性工件或較大截面尺寸的工件淬火,如可用于10模數(shù)以下齒輪的淬火。 | |
Houghto-Quench G-1050 | 13-22 | 40~80 | 90 | 同上。 | |
Houghto-Quench G-2000 | 14-22 | 40~80 | 90 | 同上。淬硬能力較HQ G稍有提高,油質透明,工件淬火后的光亮性好。 | |
Houghto-Quench S | 17 | 40~80 | 80 | 廣泛應用于各種中、高淬透性鋼。 | |
Houghto-Quench V20 | 17 | 40-80 | 90 | 專用的真空淬火油。 | |
Houghto-Quench BRT | 17 | 40-80 | 90 | 適用于齒輪、軸承、標準件和五金工具等要求光潔性的工件淬火。 |
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好富頓Houghto-Quench K-2000快速光潔淬火油
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| 性能指標 | 應用說明 | |||
粘度(mm2/s)(40℃) | 使用溫度℃ | 最大冷速典型值(IVF儀60℃)℃/s | |||
Houghto-Quench K | 13-22 | 40-80 | 100 | 適用于低淬透性工件或厚大截面尺寸的工件淬火,可用于大模數(shù)(12-14)齒輪的淬火。 | |
Houghto-Quench K-1050 | 12-21 | 40~80 | 95 | 適用于低淬透性工件或厚大截面尺寸的工件淬火,可用于10個模數(shù)以下齒輪的淬火。 | |
Houghto-Quench K-2000 |
8-14 |
40~80 |
105 | 為K系列中冷卻速度最快的淬火油之一?捎糜诖竽(shù)(12-16)齒輪的淬火。油質透明。 | |
Houghto-Quench G | 14-22 | 40~80 | 90 | 適用于各種中低淬透性工件或較大截面尺寸的工件淬火,如可用于10模數(shù)以下齒輪的淬火。 | |
Houghto-Quench G-1050 | 13-22 | 40~80 | 90 | 同上。 | |
Houghto-Quench G-2000 | 14-22 | 40~80 | 90 | 同上。淬硬能力較HQ G稍有提高,油質透明,工件淬火后的光亮性好。 | |
Houghto-Quench S | 17 | 40~80 | 80 | 廣泛應用于各種中、高淬透性鋼。 | |
Houghto-Quench V20 | 17 | 40-80 | 90 | 專用的真空淬火油。 | |
Houghto-Quench BRT | 17 | 40-80 | 90 | 適用于齒輪、軸承、標準件和五金工具等要求光潔性的工件淬火。 |
型號 | 流量 m3/h | 楊程 m | 配套 功率 kW | 電壓 V | 電流 A | 同轉 步速 r/min | 機組 效率 % | 通過顆粒最大直徑 mm |
80-400/5-200/N | 80 | 400 | 200 | 380 或 660 或 1140 | 381.56 或 220.30 或 127.16 | 3000 | 42.7 | 10 |
100-320/4-200/N | 100 | 320 | 43.8 | |||||
200-200/2-200/N | 200 | 200 | 46.9 | |||||
320-120-200/N | 320 | 120 | 55.3 |