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 泉州市睿信生物核心核心專長(zhǎng)：

 生物藥物分析方法開發(fā)\分析方法驗(yàn)證

 高品質(zhì)科研elisa試劑盒、化學(xué)發(fā)光試劑盒開發(fā)與定制

供科研使用，不得用于臨床檢驗(yàn)。 

人乙型肝炎病毒表面抗體（HBsAb）定量檢測(cè)試劑盒  （ELISA）簡(jiǎn)略版說明

【產(chǎn)品名稱】

通用名稱：人乙型肝炎病毒表面抗體（HBsAb）定量檢測(cè)試劑盒（ELISA）

英文名稱：Human Hepatitis B virus Surface Antibody（HBsAb） ELISA KIT

【包裝規(guī)格】

48 人份/盒，96 人份/盒

【檢驗(yàn)原理】乙肝核心抗體，HBcAb，人elisa試劑盒作原理

 本試劑盒采用雙抗原夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）。在預(yù)包被人乙型肝炎病毒表面抗

原（HBsAg）的微孔酶標(biāo)板中，加入人乙型肝炎病毒表面抗 體（HBsAb）校準(zhǔn)品和待測(cè)樣本，再加入另一株 HRP 標(biāo)記的人乙型肝 炎病毒表面抗原（HBsAg），經(jīng)過溫育與充分洗滌，去除未 結(jié)合的組分，在微孔板固相表面形成固相抗原-抗體-酶標(biāo)抗原的夾心復(fù)合物。加底物 A 和 B，底物在 HRP 催化下，產(chǎn)生藍(lán)色產(chǎn)物，在終止液（2M 硫酸）作用下，最終轉(zhuǎn)化為黃色，在酶標(biāo) 儀上測(cè)定吸光度（OD 值），吸光度（OD 值）與待測(cè)樣品中人乙型肝炎病毒表面抗體（HBsAb）的濃度正相關(guān)。擬合校準(zhǔn)品曲線，可以計(jì)算出樣本中人乙型肝炎病毒表面抗體（HBsAb）的濃度。

乙肝核心抗體，HBcAb，人elisa試劑盒校準(zhǔn)品濃度依次為：16、8、4、2、1、0 mIU/ml。校準(zhǔn)品已經(jīng)通過測(cè)試，結(jié)果表明 HIV1、 HIV2 和 HCV 抗體陰性，由于不存在一種試驗(yàn)方法能夠完全保證沒有這些物質(zhì)，本品必須按照 具有潛在的感染性進(jìn)行處理，處理過程應(yīng)當(dāng)遵循通用的安全措施。

需要但未提供的材料及耗材

1、酶標(biāo)儀

2、精密移液器及一次性吸頭

3、蒸餾水

4、洗瓶或者自動(dòng)洗板機(jī)

5、37℃水浴鍋或恒溫箱

6、500ml 量筒

7、無粉一次性乳膠手套

8、質(zhì)控品（可供選擇）

產(chǎn)品特點(diǎn)

樣本在 2-8℃條件下，可以儲(chǔ)存 72h，或者在- 20℃儲(chǔ)存 6 個(gè)月。樣本收集后，不是一次 檢測(cè)完，請(qǐng)按一次用量分裝凍存，避免反復(fù)凍融，使用時(shí)在室溫下解凍，確保樣品均勻充分 解凍。

【檢驗(yàn)方法】

試劑準(zhǔn)備主要優(yōu)點(diǎn)

1、使用前，所有的組分都要至少?gòu)?fù)溫 30min，確保充分復(fù)溫到室溫。

2、濃縮洗滌液：從冰箱取出的濃縮洗滌液，會(huì)有結(jié)晶產(chǎn)生，這屬于正?，F(xiàn)象，水浴加熱使 結(jié)晶完全溶解。濃縮洗滌液與蒸餾水，按 1:20 稀釋，即 1 份的濃縮洗滌液，添加 19 份的蒸 餾水。

3、底物：底物液 A 和 B，在使用前，按 1:1 體積充分混合，混合后 15 分鐘內(nèi)使用。

操作程序

1、所有試劑和組分都先恢復(fù)到室溫，標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品和樣品，建議做復(fù)孔。

2、按前面試劑準(zhǔn)備中描述的方法，配制好試劑盒各種組分的工作液。

3、從鋁箔袋中取出所需板條，剩余的板條用自封袋密封放回冰箱。

4、設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔、樣本孔和空白孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品 50μL，樣本孔加 待測(cè)樣本 50μL，空白孔不加。

5、除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的檢測(cè)抗體 100μL。

6、用封板膜蓋住反應(yīng)板，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育 60min。 7、揭開封板膜，棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置 20s，甩去洗滌液，

吸水紙上拍干。

8、如此重復(fù) 4 次（共洗板 5 次）。若使用自動(dòng)洗板機(jī)，請(qǐng)按洗板機(jī)操作程序進(jìn)行洗板，添

加浸泡 20s 的程序，可以提高檢測(cè)的精度。洗板結(jié)束，加底物前，要在干凈不掉屑的紙上， 充分拍干反應(yīng)板。

9、將底物 A 和 B 按 1:1 體積充分混合，所有孔中加入底物混合液 100μL。用封板膜蓋住 反應(yīng)板，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育 15min。

10、所有孔加入終止液 50μL，在酶標(biāo)儀上讀取各孔吸光度（OD 值）。

乙肝核心抗體，HBcAb，人elisa試劑盒代測(cè)服務(wù)

【檢驗(yàn)結(jié)果的解釋】

檢測(cè)完成后，以標(biāo)準(zhǔn)品濃度做為縱坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)的吸光度（OD 值）作為橫坐標(biāo)，利用計(jì)算 機(jī)軟件，采用四參數(shù) Logistic 曲線擬合（4-pl），創(chuàng)建標(biāo)準(zhǔn)曲線方程，通過樣本的吸光度（OD值），利用方程計(jì)算樣品的濃度值。如果樣品被稀釋，通過上述方法測(cè)的的濃度值，要乘以稀釋倍數(shù)，才是樣品的最終濃度。

【儲(chǔ)存條件及有效期】

1、2-8℃保存，切勿冷凍，有效期 6 個(gè)月。

2、開封使用后，包被微孔板放入帶有干燥劑的自封袋中，密閉自封袋，并將全部試劑放回

2-8℃冰箱。

3、開封后，按照建議的條件保存，校準(zhǔn)品、包被微孔板和 HRP 標(biāo)記抗體，有效期為 14 天， 其他成分在標(biāo)簽標(biāo)明的有效期內(nèi)是穩(wěn)定的。

【適用儀器】

半自動(dòng)的酶標(biāo)儀，如 Thermo MK3，或者國(guó)產(chǎn)酶標(biāo)儀。

【樣本要求】

樣本類型和采集 以下只是列出樣品采集的一般指南。所有樣本采集過程中，不得使用疊氮鈉做為防腐劑。

1、細(xì)胞培養(yǎng)上清：4000rpm 條件下離心 20min，去除細(xì)胞顆粒和聚合物，上清液保存在-20℃以下，避免反復(fù)凍融。

2、血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過程中避免任何細(xì)胞刺激，4000rpm 條件 下離心 20min，小心地分離出血清，保存在- 20℃以下，避免反復(fù)凍融。

3、血漿：肝素，EDTA，或檸檬酸鈉作為抗凝劑。在 4000rpm 條件下，離心 20 分鐘取上 清，血漿保存在-20℃以下，避免反復(fù)凍融。

乙肝核心抗體，HBcAb，人elisa試劑盒樣本保存和穩(wěn)定性 

【產(chǎn)品性能指標(biāo)】

1、物理性能

試劑盒的各液體組分應(yīng)澄清透明、無沉淀或者絮狀物。微孔板鋁箔袋應(yīng)真空包裝，無破 損漏氣。

2、劑量反應(yīng)曲線線性

校準(zhǔn)品劑量反應(yīng)曲線相關(guān)系數(shù) r 值，大于等0.9900。

3、精密度

批內(nèi)精密度：三組已知的高、中、低濃度樣品，進(jìn)行二十次在同一個(gè)板塊內(nèi)精度評(píng)估。 批內(nèi)變異系數(shù) CV%小于 10%。

批間精密度：三組已知的高、中、低濃度樣品，進(jìn)行二十次在不同板塊內(nèi)精度評(píng)估。批 間變異系數(shù) CV%小于 15%。

4、靈敏度最低檢出劑量小于 0.13 mIU/ml。

5、回收率三組已知的高、中、低濃度樣品，進(jìn)行五次回收率評(píng)估，回收率在 85%-115%之間。

6、特異性 本試劑盒識(shí)別天然和重組人乙型肝炎病毒表面抗體（HBsAb），與結(jié)構(gòu)類似物無交叉。

7、穩(wěn)定性2℃-8℃保存，有效期 6 個(gè)月。

乙肝核心抗體，HBcAb，人elisa試劑盒常見問題

【注意事項(xiàng)】

生物安全

1、檢測(cè)必須符合實(shí)驗(yàn)室管理規(guī)范的規(guī)定，嚴(yán)格防止交叉污染，所有樣品、洗棄液和各種廢 棄物都應(yīng)按照傳染物進(jìn)行處置。

2、試劑盒的液體組分中，含有 proclin-300 防腐劑，可能引起皮膚過敏反應(yīng)，避免吸入煙 霧與皮膚接觸。

3、底物液對(duì)皮膚、眼睛和上呼吸道有刺激作用，避免吸入煙霧。戴上防護(hù)手套，實(shí)驗(yàn)完成 后徹底洗手。

技術(shù)提示

1、混合蛋白溶液時(shí)，避免起泡。

2、加校準(zhǔn)品與樣本時(shí)，每個(gè)校準(zhǔn)品濃度和樣本都要更換移液槍頭，公共組分應(yīng)該懸臂加樣， 避免交叉污染。

3、合適的溫育時(shí)間，和充分的洗滌步驟，是保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確性的必要條件。產(chǎn)品用途了解用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)檢測(cè)乙肝二對(duì)半核心抗體(抗-HBc)的假陰性。方法:留取用ELISA檢測(cè)HBsAg陽(yáng)性、HBeAg陽(yáng)性、抗-HBc陰性血清標(biāo)本201份,分別用美國(guó)雅培AXSYM免疫發(fā)光儀微粒子酶免疫技術(shù)(MEIA)定量檢測(cè)抗HBc、ELISA進(jìn)行原倍和生理鹽水15倍稀釋測(cè)定。結(jié)果:MEIA法定量檢測(cè)抗-HBc陽(yáng)性166份,陽(yáng)性檢出率為82. 6%;陰性(S/Co1 0)35份,與ELISA一步法相比陰性符合率為19 .9%,生理鹽水15倍稀釋陽(yáng)性33份,陽(yáng)性檢出率為19 4%,原倍血清100% 陽(yáng)性。結(jié)論:MEIA法定量檢測(cè)的陽(yáng)性率遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于ELISA法檢測(cè), 15倍稀釋測(cè)定結(jié)果陽(yáng)性率比30倍稀釋有所提高,原倍血清僅作為流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果。酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測(cè)乙肝核心抗體(Anti-HBc)設(shè)定灰區(qū)在樣本判讀中的意義。方法應(yīng)用ELISA法檢測(cè)Anti-HBc,對(duì)108例檢測(cè)結(jié)果(S/CO)處于邊緣值(0.50~1.50)的樣本應(yīng)用羅氏電化學(xué)發(fā)光法和雅培酶免疫化學(xué)發(fā)光法進(jìn)行復(fù)檢。同時(shí)對(duì)3種方法檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行相關(guān)性分析。結(jié)果羅氏與雅培的檢測(cè)結(jié)果顯著相關(guān)(r=0.621,P0.01)。108份樣本,應(yīng)用其他兩種方法復(fù)檢,可以得到70例確證結(jié)果。通過乙肝PCR或既往乙肝標(biāo)志物檢測(cè)結(jié)果分析,復(fù)檢結(jié)果全部陽(yáng)性和不確定樣本皆存在既往感染,全部陰性者未有既往感染。結(jié)論 ELISA法檢測(cè)Anti-HBc在判讀上缺乏足夠的敏感性和特異性。實(shí)驗(yàn)S/CO值在0.56~1.36范圍內(nèi)判讀同樣存在假陽(yáng)性和假陰性。實(shí)驗(yàn)室應(yīng)根據(jù)自身?xiàng)l件設(shè)定檢測(cè)灰區(qū),并以"灰區(qū)"出具報(bào)告并建議定期復(fù)檢,以免造成誤診或漏檢。