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小鼠表皮調(diào)節(jié)素（EPR） elisa試劑盒用途：

本試劑盒僅供科研使用，定量檢測(cè)細(xì)胞液、體液、組織、血清、血漿等標(biāo)本中小鼠表皮調(diào)節(jié)素（EPR） 的含量。

小鼠表皮調(diào)節(jié)素（EPR） elisa試劑盒原理:

采用雙抗體夾心法測(cè)定小鼠表皮調(diào)節(jié)素（EPR） 水平。用純化的小鼠表皮調(diào)節(jié)素（EPR） 抗體包被微孔板，制成固相載體，實(shí)驗(yàn)時(shí)依次在微孔板中加入樣本及標(biāo)準(zhǔn)品，并加入HRP標(biāo)記的抗體，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，反復(fù)洗滌后加底物TMB顯色。TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化為藍(lán)色，再用硫酸終止反應(yīng)，轉(zhuǎn)變成黃色。顏色的深淺和樣品中的小鼠表皮調(diào)節(jié)素（EPR） 含量呈正相關(guān)。采用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)測(cè)定吸光度（OD值），根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算測(cè)試樣品中小鼠表皮調(diào)節(jié)素（EPR） 濃度。           

小鼠表皮調(diào)節(jié)素（EPR） elisa試劑盒試劑盒組成

實(shí)驗(yàn)材料與試劑配制：

1. 儀器與材料：酶標(biāo)儀（使用前預(yù)熱30分鐘），微量加液器、吸頭、蒸餾水或去離子水，濾紙。

2. 洗液的配制：按1:30的比例配制洗液備用。

樣品收集、處理及保存

1. 細(xì)胞培養(yǎng)上清：適用于檢測(cè)體外培養(yǎng)的細(xì)胞分泌性成份。用無(wú)菌管收集細(xì)胞上清液，以1000×g離心15分鐘，收集上清。

2. 細(xì)胞：用PBS反復(fù)洗滌細(xì)胞3次，調(diào)整細(xì)胞濃度達(dá)到104-106/ml 左右，通過(guò)反復(fù)凍融，使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份，或者細(xì)胞超聲粉碎，離心取上清液檢測(cè)。

3. 血清：在室溫下，血液自然凝固，以1000×g離心15分鐘，取上清待測(cè)。

4. 血漿：應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA 或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合后靜置10-20 分鐘后，以1000×g離心15分鐘，收集上清。

5. 體液：包括胸腹水、腦脊液，分泌物等。使用不含熱原和內(nèi)毒素的離心管收集，以1000×g離心15分鐘，收集上清。

6. 組織標(biāo)本：切取組織標(biāo)本，稱(chēng)取重量0.5mg，加入500ul 的PBS，用手工或勻漿器，或超聲破碎儀將標(biāo)本勻漿，以2000-3000 rmp離心20 分鐘，收集上清進(jìn)行檢測(cè)。

7. 樣品中不能含有NaN3，因NaN3 抑制辣根過(guò)氧化物酶的（HRP）活性。

8. 保存：如果樣品不能立即檢測(cè)，應(yīng)將其分裝，-70 ℃保存，避免反復(fù)冷凍。保存過(guò)程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心。血液標(biāo)本盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中含大量顆粒，檢測(cè)前先離心或過(guò)濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

小鼠表皮調(diào)節(jié)素（EPR） elisa試劑盒操作步驟： 

1. 取出試劑盒，室溫（20-25℃）放置30分鐘。

2. 分組：取出96孔板，根據(jù)待測(cè)樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)，把剩余的板條繼續(xù)冷藏處理。分別設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品組（6個(gè)濃度）、空白孔、待測(cè)樣品組。

標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋?zhuān)簻?zhǔn)備小試管6 只，依次編好號(hào)碼，先在各小試管中加入標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液100ul，然后取原濃度標(biāo)準(zhǔn)品100ul 加入一只已編好號(hào)的試管中，充分混勻;再在該試管中取100ul 加入第二支試管中，充分混勻；再在該試管中取100ul 加入第三只試管中，充分混勻；再在該試管中取100ul 加入第四只試管中，充分混勻；再在該試管中取100ul 加入第五只試管中，充分混勻；然后在該試管中取100ul，棄掉。第六只試管作為0 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品。

注：為減少實(shí)驗(yàn)誤差，保證準(zhǔn)確性，建議設(shè)置復(fù)孔。

3. 加樣：依照標(biāo)準(zhǔn)品的順序分別加入50ul的標(biāo)準(zhǔn)品溶液于空白微孔中；空白對(duì)照孔加入50ul的蒸餾水；其余微孔中先加樣品40ul然后再加生物素標(biāo)記的抗體10ul。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。

4. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。

5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿(mǎn)洗滌液，靜置30 秒棄去，如此重復(fù)5 次，拍干。

6. 加酶標(biāo)溶液：標(biāo)準(zhǔn)品組、待測(cè)樣本組各孔中加入50ul的酶標(biāo)溶液（空白對(duì)照孔除外）。

7. 溫育：酶標(biāo)板用封板紙密封后，放入濕盒內(nèi)于37℃恒溫孵育1小時(shí)。

8. 洗板：用稀釋后的洗滌液注滿(mǎn)每孔，靜置15-30s，充分清洗酶標(biāo)板5次，用吸水紙徹底拍干。

9. 顯色：各孔加入顯色劑A液50ul后，再加入顯色劑B液50ul。

10. 終止：25-37℃下避光反應(yīng)10-15分鐘，加入50ul終止液。

11. 讀板：在450nm波長(zhǎng)讀取各孔的OD值。

注：讀板時(shí)必須拭干板底殘留的液體和手指痕跡，讀板時(shí)間控制在終止反應(yīng)后的30分鐘內(nèi)，以免影響準(zhǔn)確性。

小鼠表皮調(diào)節(jié)素（EPR） elisa試劑盒數(shù)據(jù)計(jì)算：

以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計(jì)算出樣品濃度，即為樣品的實(shí)際濃度。

小鼠表皮調(diào)節(jié)素（EPR） elisa試劑盒注意事項(xiàng)：

1. 實(shí)驗(yàn)操作中必須使用一次性吸頭，避免交叉污染。

2. 加樣：加樣時(shí)，要控制加樣速度，避免第一孔與最后一孔間的時(shí)間間隔過(guò)大，否則將會(huì)導(dǎo)致不同的預(yù)孵育時(shí)間，從而影響實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性以及重復(fù)性。

3. 孵育：嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)上規(guī)定的孵育時(shí)間和溫度進(jìn)行。

4. 反應(yīng)時(shí)間的控制：加入底物后請(qǐng)定時(shí)觀察反應(yīng)孔的顏色變化，如果顏色較深，請(qǐng)?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應(yīng)。

5. 建議實(shí)驗(yàn)前預(yù)測(cè)樣品含量，如樣品濃度過(guò)高，應(yīng)對(duì)樣品進(jìn)行稀釋?zhuān)?jì)算結(jié)果時(shí)乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。

6. 建議使用本試劑盒時(shí)先做預(yù)實(shí)驗(yàn)（即先做標(biāo)準(zhǔn)曲線，試用幾個(gè)標(biāo)本），如果對(duì)本試劑盒有任何疑問(wèn)，可和所購(gòu)經(jīng)銷(xiāo)商聯(lián)系，如果因運(yùn)輸過(guò)程導(dǎo)致試劑盒失效，可要求調(diào)換，但概不承擔(dān)產(chǎn)品本身以外的任何損失。

小鼠表皮調(diào)節(jié)素（EPR） elisa試劑盒安全性

1． 避免人體直接接觸顯色劑A、B和終止液。一旦接觸到這些液體，請(qǐng)盡快用水沖洗。

2． 實(shí)驗(yàn)中不要進(jìn)食、抽煙或使用化妝品。

3． 不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。

小鼠表皮調(diào)節(jié)素（EPR） elisa試劑盒保存條件及有效期：

1. 試劑盒保存：2-8℃

              2.   有效期：6個(gè)月