· 五色熒光檢測,應(yīng)用更廣泛全面,包括:基因表達(dá)分析,病原體絕對定量分析,SNP基因型分析以及以陽性內(nèi)對照為基礎(chǔ)的陽性/陰性結(jié)果判定· 新型光路設(shè)計(jì)支持更多的熒光標(biāo)記檢測,包括:FAM™/SYBR® Green I, VIC®/JOE, NED™/ TAMRA™/ Cy3®, ROX™/Texas Red®,和Cy5®; 更好的激發(fā)光源設(shè)計(jì)使長波長紅色熒光的檢測靈敏度大大提高· 強(qiáng)大而靈活的反應(yīng)板設(shè)置指南軟件使反應(yīng)板設(shè)置非常方便,先進(jìn)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示與自動(dòng)分析工具使實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的分析處理更簡單直觀· 最新型半導(dǎo)體熱循環(huán)系統(tǒng)支持96孔板和單一0.2ml反應(yīng)管。· 將來可以升級至超速定量PCR反應(yīng)模式,大大縮短定量PCR反應(yīng)時(shí)間· 體積小,采用手提電腦或臺式電腦,適用于任何空間的實(shí)驗(yàn)室。 產(chǎn)品簡介:7500型實(shí)時(shí)定量PCR儀是特異性靶基因檢測與定量的一體化平臺。7500將PCR熱循環(huán),熒光檢測和各種應(yīng)用分析軟件結(jié)合在一起,可以動(dòng)態(tài)觀察PCR每一循環(huán)各反應(yīng)管中PCR擴(kuò)增產(chǎn)物逐漸增加的情況。PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)束后可以馬上得到定量結(jié)果,無需凝膠電泳分析,無需純化PCR產(chǎn)物,無需進(jìn)行任何實(shí)驗(yàn)操作。7500型實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀采用96孔反應(yīng)板或單個(gè)及8聯(lián)管,反應(yīng)體積25-100微升,實(shí)驗(yàn)可以在不到2小時(shí)內(nèi)結(jié)束。與其他人工基因定量分析方法如Northern blotting or RNase-protection assays相比,7500型實(shí)時(shí)熒光定量PCR系統(tǒng)具有時(shí)間省,靈敏度高,準(zhǔn)確性好和線性范圍寬等優(yōu)點(diǎn)。7500型實(shí)時(shí)熒光定量PCR系統(tǒng)由全球?qū)崟r(shí)定量PCR技術(shù)的領(lǐng)導(dǎo)者—美國應(yīng)用生物系統(tǒng)公司于2004年1月最新推出,它質(zhì)量優(yōu)異,實(shí)驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確可信,性能價(jià)格比極其優(yōu)越。實(shí)時(shí)定量PCR的主要應(yīng)用:實(shí)時(shí)定量PCR應(yīng)用廣泛,包括基于相對定量分析的基因表達(dá)分析,以標(biāo)準(zhǔn)曲線為基礎(chǔ)的病原體絕對定量分析,定性的PCR擴(kuò)增后核酸序列的SNP基因型分析,以及以陽性內(nèi)對照為基礎(chǔ)的陽性/陰性結(jié)果判定快速熱循環(huán)7500型實(shí)時(shí)熒光定量PCR系統(tǒng)的標(biāo)準(zhǔn)模式采用25-100微升反應(yīng)體積,可以采用96孔板或單管/8聯(lián)管進(jìn)行實(shí)驗(yàn)反應(yīng)。另外7500還可以升級為快速熱循環(huán)樣品基座,該升級為選購件,由AB公司工程師負(fù)責(zé)安裝??焖贌嵫h(huán)樣品基座采用新型96孔反應(yīng)板,這種反應(yīng)板的管內(nèi)液體上方的空間較小,可以支持5-30微升反應(yīng)體積的實(shí)驗(yàn)。采用樣品基座升級后的7500,新型96孔反應(yīng)板和新型快速熱循環(huán)定量PCR預(yù)混試劑,實(shí)時(shí)定量PCR實(shí)驗(yàn)可以在40分鐘內(nèi)完成,實(shí)驗(yàn)效果與標(biāo)準(zhǔn)2小時(shí)模式完全一致。.實(shí)時(shí)定量PCR系統(tǒng)分析軟件:7500型實(shí)時(shí)熒光定量PCR系統(tǒng)軟件采用Windows XP®操作系統(tǒng),進(jìn)行儀器控制,數(shù)據(jù)收集和數(shù)據(jù)分析,軟件功能強(qiáng)大,界面友好,包括如下特色:*反應(yīng)板設(shè)置指南,使實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)非常簡單,即使是復(fù)雜的多重定量實(shí)驗(yàn)也是如此。 *擴(kuò)增反應(yīng)曲線的實(shí)時(shí)監(jiān)測 *自動(dòng)設(shè)定熒光基線,自動(dòng)計(jì)算熒光閾值使實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析大大簡化 *采用標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行靶基因的絕對定量 *基因表達(dá)相對定量軟件提供強(qiáng)大的結(jié)果分析顯示,可以自動(dòng)將多達(dá)10塊96孔板基因表達(dá)實(shí)驗(yàn)的數(shù)據(jù)同時(shí)分析,并自動(dòng)去除無關(guān)項(xiàng)數(shù)據(jù),該軟件為選購件 *自動(dòng)SNP分型軟件以直觀的圖表輸出分型結(jié)果并自動(dòng)進(jìn)行分型質(zhì)量評分 *解離曲線數(shù)據(jù)采集操作簡單觀察方便,可以在儀器運(yùn)行時(shí)觀察解離曲線數(shù)據(jù) *觀察實(shí)時(shí)擴(kuò)增曲線時(shí)可以非常方便的標(biāo)定所對應(yīng)的樣品孔位置 *光源使用時(shí)間監(jiān)測及儀器系統(tǒng)自我診斷程序 熒光信號檢測:7500型實(shí)時(shí)熒光定量PCR系統(tǒng)的全部96個(gè)樣品孔采用同一鹵鎢燈作為光源,鹵鎢燈光通過五色光源濾光片后激發(fā)每一個(gè)分析樣品。鹵鎢燈光源增加光源濾光片后改善了長波長紅色熒光標(biāo)記的激發(fā)效果,可以大大提高紅色熒光檢測的靈敏度和定量分析的準(zhǔn)確性。激發(fā)后的熒光再通過五色熒光濾光片到達(dá)CCD照相機(jī)檢測信號。五色熒光濾光片能夠有效地分辨包括:FAM™/SYBR® Green I, VIC®/JOE, NED™/TAMRA™/ Cy3®, ROX™/Texas Red®和Cy5®在內(nèi)的多種熒光染料。
儀器技術(shù)指標(biāo) 熱循環(huán)系統(tǒng) | 新型半導(dǎo)體,96個(gè)樣品孔,可以升級到96孔快速熱循環(huán)樣品基座 | |
光學(xué)系統(tǒng) | 5色激發(fā)光源,5色熒光濾光片和超低溫CCD成像系統(tǒng) | |
Run Variables | 標(biāo)準(zhǔn)運(yùn)行模式 | 快速運(yùn)行模式 |
定量PCR運(yùn)行時(shí)間 | 2 小時(shí) | <40分鐘 |
樣品管類型 | 96孔板或0.2-mL單管 | 96孔板 |
反應(yīng)體積 | 25–100 微升 | 5–30微升 |
安裝技術(shù)指標(biāo):
在使用TaqMan®的RNA合成酶P儀器安裝板的情況下,7500型實(shí)時(shí)熒光定量PCR系統(tǒng)能夠區(qū)分5,000和10,000模板拷貝數(shù),其置信度高達(dá)99.7%儀器性能:7500型實(shí)時(shí)熒光定量PCR系統(tǒng)經(jīng)過驗(yàn)證可以達(dá)到如下性能目標(biāo):· 9個(gè)數(shù)量級的線性范圍· 可以檢測50ul反應(yīng)體積單一報(bào)告熒光TaqMan實(shí)驗(yàn)中僅10個(gè)起始拷貝數(shù)的模板,其置信度高達(dá)99.7%7500主機(jī)尺寸 34x45x49cm重量 34kg8946786742(不是聯(lián)系方式) 大量現(xiàn)貨低價(jià)供應(yīng)各種進(jìn)口品牌的熒光定量PCR儀。 ABI 7500、ABI 7300、ABI 7000、ABI 7900HT、StepOne、StepOne Plus; Agilent Mx3005P、Agilent 3000P; Roche LightCycler 480、LightCycler II; Idaho LightScanner; Rotor-Gene 6000、Rotor-Gene 3000; Bio-Rad CFX-96、Bio-Rad iQ5等各種品牌的定量PCR儀。上海和學(xué)國際貿(mào)易有限公司是是專業(yè)的實(shí)驗(yàn)室裝修,設(shè)備,耗材,環(huán)境檢測,產(chǎn)品配方方法分析一體化的世界級供應(yīng)商,是國內(nèi)實(shí)驗(yàn)室一體化配套設(shè)施品種全面,規(guī)模龐大的專業(yè)企業(yè),產(chǎn)品涵蓋顯微鏡、工具顯微鏡、投影儀、硬度計(jì)、測厚儀、放大鏡、天平、量具量儀、測繪儀器、測量儀器、實(shí)驗(yàn)儀器、電化學(xué)儀器、物理儀器、分析儀器、生化儀器、無損檢測、醫(yī)療器械、加工機(jī)械等,還有耗材,試劑,配方分析,環(huán)境檢測等產(chǎn)品。公司擁有國際一流的研發(fā)、營銷、應(yīng)用服務(wù)和供應(yīng)鏈團(tuán)隊(duì),致力于業(yè)界最前沿的各種分析檢測技術(shù)研究與應(yīng)用開發(fā),產(chǎn)品廣泛應(yīng)用于環(huán)保、冶金、石化、化工、能源、農(nóng)業(yè)、交通、水利、建筑、釀造、航空及科學(xué)研究等眾多行業(yè),并出口到美、日、英、俄羅斯等二十多個(gè)國家和地區(qū)。同時(shí)代理德國賽多利斯,瑞士梅特勒-托利多,雅馬拓,賓得,美國精棋,美國奧豪斯,IKA儀科,日本島津,日本SHODEX,日本野村化學(xué),瑞士萬通,美國哈希,安捷倫,沃特斯,3M,博樂飛等產(chǎn)品,上海精科天美,上海偉業(yè),上海三信,上海菁華,上海菁海,上海昕瑞,上海安亭電子,上海優(yōu)尼科,上海棱光,上海彼愛姆,上海光譜,上海欣茂,上海躍進(jìn),上海精宏,上海申安,上海良平,上海亞榮,上海和泰,上??茖?dǎo),上海一恒,上海越平,上海恒平,上海博訊,青島海爾,蘇州安泰,蘇州凈化等產(chǎn)品。上海和學(xué)國際貿(mào)易有限公司擁有完整、科學(xué)的質(zhì)量管理體系,誠信、實(shí)力和產(chǎn)品質(zhì)量獲得業(yè)界的認(rèn)可。歡迎各界朋友蒞臨參觀、指導(dǎo)和業(yè)務(wù)洽談。上海和學(xué)國際貿(mào)易有限有限公司聯(lián)系人:宮經(jīng)理電 話:18917633478網(wǎng) 址: www.hexueshop.com www.hexueyiqi.com 地址:上海.閔行.浦江鎮(zhèn)竹園路588號A407
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美國ABI 7300型實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀
【產(chǎn)品名稱】:7300型實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀
【產(chǎn)品型號】:7300型
【關(guān)鍵詞】:7300型實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀,基因擴(kuò)增儀,PCR儀,熒光定量PCR儀
熒光定量PCR儀產(chǎn)品概述:
7300型實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀是特異性靶基因檢測與定量的體化平臺。7300將PCR熱循環(huán),熒光檢測和各種應(yīng)用分析軟件結(jié)合在起,可以動(dòng)態(tài)觀察PCR每循環(huán)各反應(yīng)管中PCR擴(kuò)增產(chǎn)物逐漸增加的情況。PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)束后可以馬上得到定量結(jié)果,無需凝膠電泳分析,無需純化PCR產(chǎn)物,無需進(jìn)行任何實(shí)驗(yàn)操作。與其他人工基因定量分析方法如Northern blotting或RNase-protection assays相比,7300型實(shí)時(shí)熒光定量PCR系統(tǒng)具有時(shí)間省,靈敏度高,準(zhǔn)確性好和線性范圍寬等優(yōu)點(diǎn)。7300型實(shí)時(shí)熒光定量PCR系統(tǒng)由球?qū)崟r(shí)定量PCR技術(shù)的領(lǐng)導(dǎo)者—美國應(yīng)用生物系統(tǒng)公司于2004年1月推出,它質(zhì)量優(yōu)異,實(shí)驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確可信,性能價(jià)格比其優(yōu)越。
熒光定量PCR儀儀器特點(diǎn):
四色熒光同時(shí)檢測支持各種應(yīng)用需要,支持染料包括:FAM™/SYBR® Green I,VIC®/JOE™,TAMRA™和ROX™;
精確的光路設(shè)計(jì)與CCD成像和先進(jìn)的多組分熒光自動(dòng)分析校正軟件,使實(shí)驗(yàn)結(jié)果更準(zhǔn)確;
更先進(jìn)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示與自動(dòng)分析工具使實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)和分析處理更簡單直觀。
軟件特點(diǎn)
反應(yīng)板設(shè)置指南軟件使實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)非常簡單,即使是復(fù)雜的多重定量實(shí)驗(yàn)也是如此;
實(shí)時(shí)監(jiān)測擴(kuò)增曲線;
自動(dòng)設(shè)置熒光基線,自動(dòng)計(jì)算熒光閾值使數(shù)據(jù)分析大大簡化;
采用標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行靶基因的絕對定量;
基因表達(dá)相對定量軟件提供強(qiáng)大的結(jié)果分析顯示,可以自動(dòng)將多達(dá)10塊96孔板基因表達(dá)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)同時(shí)分析,并自動(dòng)去除無關(guān)項(xiàng)數(shù)據(jù);
自動(dòng)SNP分析軟件可以簡單直觀的圖表輸出分型結(jié)果并自動(dòng)進(jìn)行分型質(zhì)量評分;
解離曲線數(shù)據(jù)采集操作簡單,觀察方便,可以在儀器運(yùn)行時(shí)觀察解離曲線數(shù)據(jù);
觀察實(shí)時(shí)擴(kuò)增曲線時(shí)可以非常方便的標(biāo)定所對應(yīng)的樣品孔位置;
光源使用時(shí)間監(jiān)測及儀器系統(tǒng)自我診斷程序。
儀器性能
7300型實(shí)時(shí)熒光定量PCR系統(tǒng)經(jīng)過驗(yàn)證可以達(dá)到如下性能指標(biāo):
9個(gè)數(shù)量級的線性范圍;
可以檢測50 μL反應(yīng)體積單報(bào)告熒光TaqMan®實(shí)驗(yàn)中僅10個(gè)起始拷貝數(shù)的模板,其可置信度高達(dá)99.7%。
熒光定量PCR儀應(yīng)用:
基于相對定量分析的基因表達(dá)分析
以標(biāo)準(zhǔn)曲線為基礎(chǔ)的病原體絕對定量分析
定性的PCR擴(kuò)增后核酸序列的SNP基因型分析
以陽性內(nèi)對照為基礎(chǔ)的陽性/陰性結(jié)果判定
熒光定量PCR儀規(guī)格:
加熱系統(tǒng):珀耳帖效應(yīng)系統(tǒng)
加熱塊規(guī)格:96孔加熱塊
可選耗材:96孔反應(yīng)板與光學(xué)蓋膜
96孔反應(yīng)板與光學(xué)平蓋
0.2mL 8連管與光學(xué)平蓋
0.2mL 單管與光學(xué)平蓋
支持容量:20-100 μL
樣本升降溫速率:±1.1℃/秒
加熱塊高升降溫速率:1.6℃/秒
溫度范圍:4℃-100℃
溫度精度:設(shè)置值/顯示溫度的±0.25℃(35℃至95℃)(時(shí)鐘啟動(dòng)后3分鐘開始測量)
溫度均性:±0.5℃(35℃至95℃)(時(shí)鐘啟動(dòng)后30秒開始測量)
光學(xué)系統(tǒng):單激發(fā)光源,四色發(fā)射光濾光片和CCD成像系統(tǒng)
安裝時(shí)已校準(zhǔn)染料:SYBR® Green I, FAM™, VIC™, JOE™, NED™, TAMRA™, ROX™
被動(dòng)參照染料:ROX™染料
數(shù)據(jù)采集:對所有反應(yīng)孔收集的所有四色濾片的數(shù)據(jù)(無論何種反應(yīng)板設(shè)置),試驗(yàn)結(jié)束后反應(yīng)板設(shè)置可修改。
定量PCR運(yùn)行時(shí)間:不超過2小時(shí)
軟件:應(yīng)用軟件(絕對定量分析、相對定量分析、等位基因分型研究)
可選升級包:相對定量分析研究(軟件可自動(dòng)將多達(dá)10塊96孔板樣品Ct值自動(dòng)轉(zhuǎn)換成柱狀圖同時(shí)分析)引物分析軟件(用于客戶自行設(shè)計(jì)引物和探針)
尺寸:34×45×49厘米
重量:29千克
更多的基因擴(kuò)增儀產(chǎn)品信息請查看:
http://www.89-china.com/category-136-b0.html
公司簡介:
迪圖(上海)生物科技有限公司(www.89-china.com)實(shí)業(yè)有限公司于2007年始組建實(shí)驗(yàn)室儀器配套儀器、MRO工業(yè)品等產(chǎn)品線下供應(yīng)體系,于2009年正式推出線上采購運(yùn)行平臺。迪圖(上海)生物科技有限公司作為上海早從事MRO工業(yè)品和實(shí)驗(yàn)室儀器儀表的企業(yè),其實(shí)力雄厚、管理科學(xué)、質(zhì)量保證,售后完備、信譽(yù)至上。
TL98 四通道實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀
產(chǎn)品特點(diǎn)
通道1:FAM, SYBR Green I;
通道2:HEX, VIC, TET,JOE;
通道3:ROX,TEXAS RED;
通道4:CY5 等熒光染料,試劑開放
激發(fā)中心波長
通道1:470nm 通道2:523nm 通道3:571nm 通道3:630nm
檢測中心波長
控溫范圍
4.0℃-99.0℃
熱蓋溫度
100℃~120℃
溫塊升/降溫速度
0.1-4.2℃/s
溫度均勻性
≤±0.2℃
溫度精確度
≤±0.1℃
溫度顯示精度
0.1℃
檢測范圍
101-1010DNA/RNA copy/ml
CT值重復(fù)性誤差
CV≤2.1%
核酸精度相關(guān)系數(shù)
R≥0.997
溫階
1~99
循環(huán)
1~999
保溫時(shí)間
4℃長期
升級方式
遠(yuǎn)程硬件內(nèi)控軟件升級
應(yīng)用
基于標(biāo)準(zhǔn)曲線的絕對定量;相對標(biāo)準(zhǔn)曲線;
基于比較Ct值的相對定量(支持多內(nèi)參基因和 PCR效率校正); 高分辨率熔解曲線分析等
網(wǎng)絡(luò)接口,通過U盤拷貝實(shí)驗(yàn)配置和數(shù)據(jù)
35kg
北京艾思普科技有限公司于科學(xué)實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備服務(wù)應(yīng)用專業(yè)性技術(shù)公司。公司從事生物科學(xué)儀器安裝調(diào)試維護(hù)、二手儀器、儀器維修、設(shè)備改造以及配件銷售服務(wù)。公司擁有一批專業(yè)維修工程師,具有多年維修經(jīng)驗(yàn),技術(shù)精湛。我們以真誠的服務(wù)態(tài)度和專業(yè)的技術(shù)為客戶提供一站式服務(wù),為客戶提供更加便利、省心的服務(wù)解決方案。成為實(shí)驗(yàn)室科研攻關(guān)的貼心管家是我們的追求。
維修項(xiàng)目:1、PCR(定量)儀類儀器:ABI Biometra Roche Bio-Rad(MJ) Biotek Techne Eppendorf以及東勝等品牌;2、高壓滅菌器類儀器:Sanyo Hirayama Alp Tomy Yamato等品牌;3、CO2培養(yǎng)箱類儀器:Binder Galaxy NBS Kendro(Heraeus) Sanyo Forma等;4、厭癢工作站:Ruskinn Dws Therma等;5、離心機(jī):Hettich Sigma Eppendorf等;6、發(fā)酵罐: nbs. applikon貝朗微生物鑒定儀、超聲波破碎儀、折光儀和旋光儀、馬福爐、凍干機(jī)與離心濃縮產(chǎn)品、生物凈化和消毒氣體發(fā)生器、恒溫浴器、干浴器、振蕩器、搖床、紫外無菌操作臺、攪拌器、比重計(jì)、全自動(dòng)電位滴定儀、水份測定儀、數(shù)字密度計(jì)、數(shù)字折光率儀及糖度測定儀、熱流儀,熱導(dǎo)儀、切片機(jī)。.服務(wù):1、維修完成交付使用后再付款。2、定期上門做保養(yǎng),達(dá)到的工作狀態(tài)。3、北京市區(qū)內(nèi)免費(fèi)上門服務(wù)。4、維修之后實(shí)施保修制度,無后顧之憂。
3.1.1 雙色熒光PCR系統(tǒng),而在一個(gè)反應(yīng)孔中,可以同時(shí)檢測兩個(gè)不同波長的熒光信號
3.1.2 具有動(dòng)態(tài)溫度梯度功能,可以同時(shí)運(yùn)行8個(gè)不同的溫度;梯度溫度孵育時(shí)間相同
3.1.3 4臺設(shè)備可以同時(shí)連由一臺電腦控制3.2 技術(shù)要求 3.2.1 樣品容量:48x0.2mL
3.2.2 反應(yīng)體積:10-100μL
3.2.3 光源:48個(gè)發(fā)光二極管(LED)陣列
3.2.4 檢測器:2個(gè)分光光敏二極管(PDT)
3.2.5 激發(fā)波長:470-500nm
3.2.6 檢測波長:通道1:523-543nm;通道2:540-700nm
3.2.7 檢測靈敏度:能檢測人類基因組中的單拷貝基因
3.2.8 動(dòng)態(tài)溫度梯度功能:同時(shí)運(yùn)行8個(gè)不同的溫度
熒光定量PCR儀 傳染病診斷儀
型號:GR/TL988
北京GR/TL988熒光定量PCR儀使用方法應(yīng)用領(lǐng)域臨床疾病診斷:各型肝炎、艾滋病、禽流感、結(jié)核、性病等傳染病診斷和療效評價(jià);地中海貧血、血友病、性別發(fā)育異常、智力低下綜合癥、胎兒畸形等優(yōu)生優(yōu)育檢測;腫瘤標(biāo)志物及瘤基因檢測實(shí)現(xiàn)腫瘤病診斷;遺傳基因檢測實(shí)現(xiàn)遺傳病診斷。
北京GR/TL988熒光定量PCR儀使用方法動(dòng)物疾病檢測:禽流感、新城疫、口蹄疫、豬瘟、沙門菌、大腸埃希菌、胸膜肺炎放線桿菌、寄生蟲病等、炭疽芽孢桿菌。
北京GR/TL988熒光定量PCR儀使用方法食品安全:食源微生物、食品過敏源、轉(zhuǎn)基因、乳品企業(yè)阪崎腸桿菌等檢測。
科學(xué)研究:醫(yī)學(xué)、農(nóng)牧、生物相關(guān)分子生物學(xué)定量研究。
應(yīng)用行業(yè):各級各類醫(yī)療機(jī)構(gòu)、大學(xué)及研究所、CDC、檢驗(yàn)檢疫局、獸醫(yī)站、食品企業(yè)及乳品廠等。
實(shí)時(shí)熒光定量PCR的出現(xiàn),極大地簡化了定量檢測的過程,而且真正實(shí)現(xiàn)了絕對定量。多種檢測系統(tǒng)的出現(xiàn),使實(shí)驗(yàn)的選擇性更強(qiáng)。自動(dòng)化操作提高了工作效率,反應(yīng)快速、重復(fù)性好、靈敏度高、特異性強(qiáng)、結(jié)果清晰。隨著生物芯片技術(shù)和熒光探針定量技術(shù)的結(jié)合,熒光定量PCR在醫(yī)學(xué)檢測及其他各個(gè)領(lǐng)域中的應(yīng)用前景將更加廣闊,令人欣喜。盡管如此我們也應(yīng)清晰認(rèn)識到,F(xiàn)Q-PCR技術(shù)在我國各個(gè)研究領(lǐng)域的應(yīng)用并不多見,這就需要我國學(xué)者迎頭趕上,使FQ-PCR技術(shù)更充分地推廣,以推動(dòng)研究工作的快速發(fā)展。
熒光定量PCR 實(shí)驗(yàn)步驟:
①取凍存已裂解的細(xì)胞,室溫放置5分鐘使其完全溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lv仿,蓋緊管蓋。手動(dòng)劇烈振蕩管體15秒后,15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lv仿相,中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時(shí)加入的TRIZOL試劑的60%。
③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,混勻后15到30℃孵育10分鐘后,于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時(shí)離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀?;靹蚝螅?℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時(shí),先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次,使其完全溶解,獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。
1)紫外吸收法測定
先用稀釋用的TE溶液將分光光度計(jì)調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,讀取其在分光光度計(jì)260nm和280nm處的吸收值,測定RNA溶液 濃度和純度。
① 濃度測定
A260下讀值為1表示40 μg RNA/ml。樣品RNA濃度(μg/ml)計(jì)算公式為:A260 ×稀釋倍數(shù)× 40 μg/ml。具體計(jì)算如下:
RNA溶于40 μl DEPC水中,取5ul,1:100稀釋至495μl的TE中,測得A260 = 0.21
RNA 濃度= 0.21 ×100 ×40 μg/ml = 840 μg/ml 或 0.84 μg/μl
取5ul用來測量以后,剩余樣品RNA為35 μl,剩余RNA總量為:
35 μl × 0.84 μg/μl = 29.4 μg
②純度檢測
RNA溶液的A260/A280的比值即為RNA純度,比值范圍1.8到2.1。
2)變性瓊脂糖凝膠電泳測定
①制膠
1g瓊脂糖溶于72ml水中,冷卻至60℃,10 ml的10× MOPS電泳緩沖液和18 ml的37% 甲醛溶液(12.3 M)。
10×MOPS電泳緩沖液
濃度 成分
0.4M MOPS,pH 7.0
0.1M 乙酸鈉
0.01M EDTA
灌制凝膠板,預(yù)留加樣孔至少可以加入25 μl溶液。膠凝后取下梳子,將凝膠板放入電泳槽內(nèi),加足量的1×MOPS電泳緩沖液至覆蓋膠面幾個(gè)毫米。
②準(zhǔn)備RNA樣品
取3μgRNA,加3倍體積的甲醛上樣染液,加EB于甲醛上樣染液中至終濃度為10μg/ml。加熱至70℃孵育15分鐘使樣品變性。
③電泳
上樣前凝膠須預(yù)電泳5min,隨后將樣品加入上樣孔。5–6V/cm電壓下2h,電泳至溴酚蘭指示劑進(jìn)膠至少2–3cm。
④紫外透射光下觀察并拍照
28S和18S核糖體RNA的帶非常亮而濃(其大小決定于用于抽提RNA的物種類型),上面一條帶的密度大約是下面一條帶的2倍。還有可能觀察到一個(gè)更小稍微擴(kuò)散的帶,它由低分子量的RNA(tRNA和5S核糖體RNA)組成。在18S和28S核糖體帶之間可以看到一片彌散的EB染色物質(zhì),可能是由mRNA和其它異型RNA組成。RNA制備過程中如果出現(xiàn)DNA污染,將會在28S核糖體RNA帶的上面出現(xiàn),即更高分子量的彌散遷移物質(zhì)或者帶,RNA的降解表現(xiàn)為核糖體RNA帶的彌散。用數(shù)碼照相機(jī)拍下電泳結(jié)果。
型號 RG6500HRM 通道 5+HRM 激發(fā)光源 6個(gè)LED 光源(綠、黃、橙、紅、紫紅、HRM) 激發(fā)波長 470nm,530nm,585nm,625nm,670nm,460nm(HRM) 檢測波長 510nm,555nm,610nm,660nm,710nm,510nmLP(HRM) 轉(zhuǎn)速 離心式、400RPM 樣品通量 36,72,100 線性范圍 12次方 溫度均一性 ±0.01℃ 溫度分辨率 ±0.02℃ 升降溫速率 10℃/s 控溫范圍 室溫-99℃ 檢測器 光電倍增管(PMT),靈敏度高 消耗品 0.2mLPCR管, 0.1mL管, genedisc72, genedisc100 尺寸 370mm×420mm×560mm(開門時(shí))×275mm 重量 14kg 電腦 PentiumTMⅣ,2GHz,512RAM,Windows XP,USB或RS232接口 電源 100-120V@60Hz,200-240V@50Hz;功率消耗8VA(待機(jī))
Rotor-Gene6000是Corbett公司一代的實(shí)時(shí)熒光定量PCR系統(tǒng)。它采用熒光標(biāo)記的方法對基因進(jìn)行PCR擴(kuò)增,通過對熒光參數(shù)的測定分析基因的拷貝數(shù)從而定量計(jì)算擴(kuò)增發(fā)生前的原始基因拷貝數(shù)。該儀器可以用于基因的表達(dá)調(diào)控分析、細(xì)菌和病毒的快速分型和鑒定、轉(zhuǎn)基因動(dòng)植物的檢測、食品中病原微生物的檢測。該儀器同時(shí)具備高分辨率熔解(HRM)分析功能,可通過高分辨率熔解曲線進(jìn)行突變檢測、SNP分析、等基因型、HLA配型檢測、突變發(fā)現(xiàn)等工作。
除RG6500HRM之外,RG6000系列還有另外四個(gè)型號,分別為:RG6200,RG6200HRM, RG6500, RG6600。