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更靈敏、更快捷、更節(jié)省，讓你的科研不再受支原體困擾！

支原體污染成為細胞培養(yǎng)的重大隱患產(chǎn)品特點                                                                                                        

支原體在分類學上是處于細菌和病毒之間的種微生物，是細胞培養(yǎng)中常見的種污染源，被支原體感染的細胞培養(yǎng)物其正常的生長和代謝會受到大的影響。而重組表達的蛋白質(zhì)，其活性也會受到影響，甚至完全失去活性。有研究表明，范圍內(nèi)超過15%的培養(yǎng)細胞都有支原體污染。支原體感染會對細胞造成多方面的影響，這包括代謝、免疫或生化特性、生長狀況、以及細胞存活等多方面的改變。支原體難以檢測，同時也很難消除，它們能輕易地通過標準濾膜，同時也能拮抗絕大多數(shù)的抗生素。

常規(guī)檢測才能有效規(guī)避細胞支原體污染                                                                                           

常規(guī)性的進行支原體檢測是保證細胞培養(yǎng)中不受到支原體污染影響的唯途徑。這樣做才能保證您所獲得的數(shù)據(jù)質(zhì)量與可靠性。傳統(tǒng)的支原體檢測方法需要在特殊的選擇性培養(yǎng)基作用下對樣品進行培養(yǎng)，時間往往長達數(shù)周，費時、費力并且無法獲得足夠的靈敏度和特異性。

目微探TM支原體檢測試劑盒現(xiàn)貨促銷產(chǎn)品資料                                                                                           

上海創(chuàng)凌生物科技有限公司榮幸地推出微探TM支原體檢測試劑盒。這是種基于聚合酶鏈式反應（PCR*）的檢測方法。檢測過程高效、快速、成本低、可信度高，適合用于細胞傳代培養(yǎng)流程中進行的常規(guī)性檢測，整個檢測過程僅需幾個小時而已。與此同時，通過電泳來檢查PCR反應的產(chǎn)物條帶是否存在，也避免了同位素標記等繁瑣的過程。

微探TM支原體檢測試劑盒能檢測支原體的各亞種，這其中包括 M. fermentans, M. hyorhinis, M. arginini, M. orale, M. hominis, M. arthritidis, M. hyopneumoniae ａnd Acholeplasma laidlawii。有研究表明，細胞培養(yǎng)中超過96%的污染都是由上述這些支原體所造成的。

* PCR過程為Hoffmann-La Roche所擁有的利保護。進行PCR試驗需獲得許可。

微探TM檢測方法主要優(yōu)點                                                                                           

高敏感度 - 可檢測您樣品中少量的支原體DNA。 特異性 - 微探TM試劑盒特異性的檢測超過25中“典型”支原體亞種。 可靠性 - 本試劑盒中包含內(nèi)對照DNA及陽性對照DNA，可保證實驗結(jié)果的可重復性，減小因操作而帶來的誤差。 快速 - 整個試驗流程可以在5小時左右完成。 通用性 - 對于細胞試驗中常見的支原體污染，可以通過同樣的實驗流程進行檢測。 方便 - 試劑盒中包含經(jīng)過優(yōu)化的PCR試劑，可以使檢測常規(guī)化。 易用 - 可以直接用于檢測細胞培養(yǎng)物，不需要額外的去除抗生素或改變培養(yǎng)條件等工作。 樣品容易制備 - 細胞培養(yǎng)物或其他樣品上清液經(jīng)煮沸處理可以直接作為PCR反應模板。 

結(jié)果容易分析 - 通過電泳分析PCR產(chǎn)物可以清晰的分析和判斷實驗結(jié)果。

微探TM支原體檢測試劑盒現(xiàn)貨促銷檢測工作原理                                                                                           

上海創(chuàng)凌生物科技有限公司的微探TM試劑盒采用高靈敏性的PCR技術(shù)來進行支原體檢測。支原體的rRNA基因序列通常是高度保守的。而基因間的區(qū)域（如16S基因和23S基因之間）卻在不同亞種之間有著序列和長度的不同。整個PCR的反應流程分為以下兩步：步驟1：用對引物（F1和R1）擴增16S和23S基因間區(qū)域。步驟2：用第二對引物（F2和R2）進行巢式PCR。

本檢測方法不受其他來源（如所培養(yǎng)細胞）DNA的影響。采用巢式PCR的方法，不但提高了檢測的靈敏度，同時也提高了特異性。

試劑盒組成：                                                                                           

經(jīng)過濃度優(yōu)化的引物對                                                                                                                                                            

陽性對照DNA                                                                                                                                                            

內(nèi)對照DNA                                                                                                                                                            

10 X PCR緩沖液                                                                                                                                                            

使用者需要自備的儀器和試劑：                                                                                           

PCR儀                                                                                                                                                                                       

瓊脂糖凝膠電泳設(shè)備                                                                                                                                                            

微量離心管                                                                                                                                                            

離心機                                                                                                                                                            

微量移液器                                                                                                                                                            

其它PCR反應常規(guī)試劑                                                                                                                                                            

微探TM支原體檢測試劑盒現(xiàn)貨促銷訂購信息：

本試劑盒僅用于研究目的。

創(chuàng)凌生物現(xiàn)貨為您提供優(yōu)質(zhì)的微探TM支原體檢測試劑盒產(chǎn)品，并保證相關(guān)售后服務(wù)，歡迎來選購微探TM支原體檢測試劑盒！我們還為您提供其他實驗室儀器、試劑、耗材及相關(guān)技術(shù)服務(wù)，如有需要，可與我們聯(lián)系！

創(chuàng)凌生物直致力于生命醫(yī)學和生物技術(shù)域的積累與沉淀，目創(chuàng)凌生物技術(shù)研發(fā)團隊50余人，配備了先進的分析和檢測設(shè)備，通過自主創(chuàng)新以及與國內(nèi)外的科研單位合作研發(fā)，不斷突破新技術(shù)，質(zhì)量成熟，各類產(chǎn)品和技術(shù)服務(wù)贏得了眾多科研機構(gòu)的認可。

以IL-3特異的單克隆抗體包被酶標板，而后予以封閉，由試劑盒提供（96孔可移動酶標孔）。每孔加入樣品，如果其中含有IL-3則可與已包被于板上的抗體結(jié)合。洗去樣品中未結(jié)合的蛋白后，每孔加入酶標IL-3多克隆抗體，則可與最初孵育中所結(jié)合的IL-3相作用。而后洗去未結(jié)合的酶標抗體，每孔加入底物液，顯色。顏色深淺與第一步所結(jié)合的IL-3的量成正比。

測定樣品的同時，可同時作不同濃度標準IL-3的系列孔，而后作IL-3濃度對光密度值的標準曲線，由樣品孔的光密度值在標準曲線上可找到未知樣品中相應的IL-3濃度。

（1）IL-3酶標：板包被有鼠抗人IL-3單克隆抗體，并已封閉的96孔聚苯乙烯酶標板（12條，8孔/條）。

（2）辣根過氧化物酶（HRP）標記的IL-3多克隆抗體。

（3）IL-3標準品  經(jīng)透析的重組IL-3（10ng），保存于蛋白保存緩沖液中。

（4）檢測稀釋液RD1 6ml蛋白保存緩沖液，用于樣品為血清或血漿的檢測。

（5）校正稀釋液RD5 21ml蛋白保存緩沖液。

（6）校正稀釋液RD6 21m1動物血清保存緩沖液。用于樣品為血清或血漿檢測。

（7）洗液：25倍濃度的母液21ml。

（8）顯色劑A：12.5ml穩(wěn)定的過氧化化氫。

（9）顯色劑B：12.5ml穩(wěn)定的色原（四甲基聯(lián)苯胺鹽）。

（10）終止液：2mol/L的硫酸6ml。

11.酶標板蓋

（1）樣品的采集：

①組織培養(yǎng)上清離心，去除顆粒性物質(zhì)，貯存于－20℃。避免反復凍融。

②血清：用血清分離管（SST），離心獲得。分裝血清，貯存于－20℃。避免反復凍融。

③血漿：收集血漿，以EDTA作為抗凝劑。離心去除顆粒，貯存于－20℃。避免反復凍融。

（2）試劑的準備：

①洗液：將母液稀釋25倍，得500ml應用洗液。貯存于2～8℃，可保存30天。注意稀釋前須將母液中的沉淀溶解。

②底物液：顯色劑A和B等量混合，15min內(nèi)應用。應用時，每孔加入200μl該混合液。

③標準IL-3：標準IL-3的稀釋程度及跨度的選擇十分重要，需要能夠反映待測樣品中IL-3的含量。如果可能，最好用與待測樣品相同的稀釋度；如果不能，則需用稀釋液。校正稀釋液RD5可用于許多方面，包括大部分組織培養(yǎng)液中IL-3的測定。校正釋液RD6可用于待測血清或血漿樣品。

具體方法：將標準IL-3中加入5ml校正稀釋液RD5（用于組織培養(yǎng)液）、校正稀釋液RD6（血清或血漿樣品）或用能反映待測樣品中IL-3含量的稀釋度。這樣則配成2000pg/ml的母液。以該母液倍比稀釋（如下述），使此法IL-3的檢測范圍為10pg～2000pg/ml。

建議標準：IL-3所用的稀釋度為2000pg/ml，1000pg/ml，500pg/ml，250pg/ml，125pg/ml，62.5pg/ml，31.3pg/ml以及0pg/ml。

方法：

A.將上述各稀釋度分別標記于6個試管或小瓶，每管加入2ml稀釋液。

B.在1000pg/ml管中加入2ml標準IL-3，混勻。

C.從1000pg/ml管中取2ml加入500pg/ml的管中，混勻。

D.連續(xù)重復該過程，完成倍比稀釋。

E.以未稀釋的標準IL-3作為標準曲線的最高濃度（2000pg/ml）。以合適的稀釋度作為零濃度（0pg/ml）。

凍于－20℃，可保存30天。避免反復凍融。

（3）步驟：

①對于血清或血漿樣品，在加入樣品及標準之前，每一個樣品及標準需加入50μl檢測稀釋液RD1。注：非血清或血漿樣品不需要加此試劑。

②每孔加入200μl的標準或樣品，室溫孵育2h。

③吸干，每孔加入400μl洗液，洗4次。殘余液以干凈的吸水紙吸干。

④每孔加入HRP標記的IL-3多克隆抗體200μl，室溫孵育2h。

⑤重復③洗板。

⑥每孔加入底物液200μl，室溫孵育20min。

⑦每孔加入終止液50μl，混勻。

⑧30min內(nèi)在分光光度儀上測定每孔的吸光度A450nm。如果不需要波長校正，設(shè)于540nm或570nm。如果需要波長較正，則需用540nm或570nm）的A值減去450nm處的A值。

（4）結(jié)果計算：平行孔取平均值，并將樣品的A值減去零標準A值。

以各標準IL-3濃度對其相應的A值作圖。將數(shù)據(jù)在Log/Log坐標紙上線性化并回歸分析。

　小鼠IL-3檢測試劑盒應用領(lǐng)域可抑制內(nèi)毒素誘導的巨噬細胞IL-1、IL-6和INF等的產(chǎn)生，還可強烈抑制內(nèi)毒素誘導的單核細胞IL-10mRNA的合成，即自我調(diào)節(jié)作用，同時也是高位調(diào)節(jié)的IL-1受體阻斷劑。因此，IL-10是維護細胞因子網(wǎng)絡(luò)平衡的重要負調(diào)節(jié)因子。其作用機制可能是降低抗原遞呈細胞MHCⅡ類抗原表達，或誘導抗原遞呈細胞產(chǎn)生另一種細胞因子，改變細胞內(nèi)信號傳遞途徑，從而選擇性抑制某些細胞因子mRNA轉(zhuǎn)錄，并與Th2細胞產(chǎn)生的IL-4、IL-5有協(xié)同作用。發(fā)病第1天，輕型急性胰腺炎患者血清IL-10明顯高于重型者，而后幾天兩者血清IL-10濃度趨于一致。急性胰腺炎患者血清IL-10在入院當日最高，入院后1～5天輕型者血清IL-10迅速下降，重型者則維持在較高水平。以上提示：(1)血清IL-10可用于急性胰腺炎早期診斷；(2)作為急性胰腺炎嚴重程度和預后的評估指標；(3)IL-10及其誘生劑可用于急性胰腺炎治療［1，2］。另有動物實驗證實外源性IL-10可減輕腸缺血/再灌注鼠的全身炎癥反應［3］，對致死性內(nèi)毒素血癥鼠有保護作用［4］。不過也有實驗表明外源性IL-10并不能降低膿毒癥的發(fā)病率和死亡率［5］。

　　小鼠IL-3檢測試劑盒參數(shù)規(guī)格實驗顯示急性彌漫性腹膜炎患者，血清IL-10水平在入院時較健康人明顯升高，手術(shù)后有所下降，至接近痊愈時，基本恢復正常。提示IL-10參與了急性彌漫性腹膜炎的病理生理過程，急性彌漫性腹膜炎病情發(fā)展較迅猛，如不及時治療，很快出現(xiàn)敗血癥、ARDS、DIC及至MODS。其發(fā)病機制為急性彌漫性腹膜炎誘發(fā)全身炎癥反應綜合征(SIRS)。在SIRS發(fā)病中，內(nèi)毒素、TNF-α、IL-1、IL-4、IL-8、IFN-γ等介質(zhì)起重要作用［6］，而且IL-10可抑制內(nèi)毒素誘導的上述細胞因子的合成。因此，急性彌漫性腹膜炎時，血清IL-10的升高是機體對全身炎癥反應一種防御反應。根據(jù)外源性IL-10對急性胰腺炎全身炎癥反應及致死性內(nèi)毒素血癥鼠的保護作用，可以推測外源性IL-10對急性彌漫性腹膜炎可能有治療作用。外源性IL-10可抑制巨噬細胞的殺菌活性，它能促進小鼠念珠菌和李斯特菌的增殖，并增加動物死亡率［5］。另小鼠白介素3檢測試劑盒外，其負面作用是否與外源性，IL-10的劑量有關(guān)，因IL-10還有自我調(diào)節(jié)作用［1］，劑量過大、血清IL-10過高可能會反過來抑制IL-10mRNA表達。故外源性IL-10對急性彌漫性腹膜炎的作用如何，尚有待進一步通過動物實驗來研究探討。 檢測急性彌漫性腹膜炎患者血清中白細胞介素-10(IL-10)，并探討IL-10在急性彌漫性腹膜炎發(fā)病中意義。方法  41例急性彌漫性腹膜炎患者和20例健康人血清IL-10的測定采用雙抗體夾心ELISA檢測法。結(jié)果  急性彌漫性腹膜炎患者入院時、術(shù)后第1、3、6天血清IL-10濃度分別為423.7±31.6、351.2±27.3、224.5±23.6、103.6±21.7pg/ml。健康人血清IL-10濃度為92.5±21.6pg/ml。與健康人比較，急性彌漫性腹膜炎患者入院時血清IL-10明顯升高(P＜0.01)，術(shù)后第1、3、6天逐漸下降至正常。結(jié)論  IL-10增加是機體的一種防御反應。

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人細菌性陰道病快速檢測試劑盒相關(guān)知識：血漿：應根據(jù)試劑盒的要求選擇 EDTA 、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，加入 10 ％（ v/v ）抗凝劑 （ 0.1M 檸檬酸鈉或 1% heparin 或2.0%EDTA.Na2） 混合10-20 分鐘后，離心 20 分鐘左右（ 2000-3000 轉(zhuǎn) / 分）。仔細收集上清。如有沉淀形 成，應再次離心。尿液、胸腹水、腦脊液：用無菌管收集。離心 20 分鐘左右（ 2000-3000 轉(zhuǎn) / 分）。仔細收集上清。如有沉淀形成，應再次離心。計算以標準物的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實際濃度。

人細菌性陰道病快速檢測試劑盒注意事項1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。2．濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果。3．各步加樣均應使用加樣器，并經(jīng)常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間最好控制在5分鐘內(nèi)，如標本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。4． 請每次測定的同時做標準曲線，最好做復孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標準品孔第一孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定，計算時請最后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。6．底物請避光保存。7．嚴格按照說明書的操作進行，試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。9．本試劑不同批號組分不得混用。10. 如與英文說明書有異，以英文說明書為準。

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人細菌性陰道病快速檢測試劑盒

聯(lián)系電話135 6451 5386  QQ 1161399267  余先生

產(chǎn)品規(guī)格：48T/96T

檢測方法： ELISA酶聯(lián)免疫法

說 明 書：隨貨發(fā)送，也可直接聯(lián)系在線銷售索取

測試種屬：人、大小鼠、豚鼠、兔子、牛、羊、豬、雞、鴨elisa試劑盒等種屬

檢測目的：用于測定血清，血漿及相關(guān)液體等樣本。例如適合檢測包括血清、血漿、尿液、胸腹水、灌洗液、腦脊液、細胞培養(yǎng)上清、組織勻漿等標本。

試劑盒保存及有效期：2-8℃,避光保存:6個月。

產(chǎn)品產(chǎn)地：進口/國產(chǎn)

產(chǎn)品庫存：

品牌：自主研發(fā)/進口原裝

產(chǎn)品價格：價格優(yōu)惠，歡迎來電洽談！

試劑盒使用范圍：僅供科研檢測,不得用于臨床.

產(chǎn)品價格：價格優(yōu)惠,歡迎來電洽談！

ELISA試劑盒定性定量檢測一步到位，可同時大批量完成多種屬的檢測工作，而且一天之內(nèi)可以檢查幾百甚至上千份標本，正規(guī)專業(yè)的我們，一定能幫您，將實驗做得更好，更精確。試驗過程中，如有任何疑問都可和我們聯(lián)系，無論是售前、售中、售后我們都將始終如一，將優(yōu)質(zhì)服務(wù)進行到底本試劑僅供研究使用 目的：本試劑盒用于測定小鼠血清，血漿及相關(guān)液體樣本中酸性磷酸酶（ACP）含量。實驗原理：本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中小鼠酸性磷酸酶（ACP）水平。用純化的小鼠酸性磷酸酶（ACP）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入酸性磷酸酶（ACP），再與HRP標記的酸性磷酸酶（ACP）抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的酸性磷酸酶（ACP）呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中小鼠酸性磷酸酶（ACP）濃度。小鼠酸性磷酸酶（ACP）ELISA試劑盒組成：試劑盒組成 48孔配置 96孔配置 　保存說明書 1份 1份 封板膜 2片（48） 2片（96） 密封袋 1個 1個 酶標包被板 1×48 1×96 2-8℃保存標準品：720ng/L 0.5ml×1瓶 0.5ml×1瓶 2-8℃保存標準品稀釋液 1.5ml×1瓶 1.5ml×1瓶 2-8℃保存酶標試劑 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存樣品稀釋液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存顯色劑A液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存顯色劑B液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存終止液 3ml×1瓶 6ml×1瓶 2-8℃保存濃縮洗滌液 （20ml×20倍）×1瓶 （20ml×30倍）×1瓶 2-8℃保存小鼠酸性磷酸酶（ACP）ELISA試劑盒樣本處理及要求：1. 血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清，保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應再次離心。2. 血漿：應根據(jù)標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應該再次離心。3. 尿液：用無菌管收集，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。4. 細胞培養(yǎng)上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。檢測細胞內(nèi)的成份時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融，以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。5. 組織標本：切割標本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。標本融化后仍然保?-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。6. 標本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融.7. 不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。小鼠酸性磷酸酶（ACP）ELISA試劑盒操作步驟標準品的稀釋與加樣：在酶標包被板上設(shè)標準品孔10孔，在第一、第二孔中分別加標準品100μl，然后在第一、第二孔中加標準品稀釋液50μl，混勻；然后從第一孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl，混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉，再各取50μl分別加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul，混勻；混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl，混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl，混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。（稀釋后各孔加樣量都為50μl，濃度分別為 詳見說明書（業(yè)務(wù)人員可提供））。加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。配液：將30（48T的20倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水30（48T的20倍）倍稀釋后備用。洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。溫育：操作同3。洗滌：操作同5。顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。小鼠酸性磷酸酶（ACP）ELISA試劑盒注意事項：試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果。各步加樣均應使用加樣器，并經(jīng)常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間最好控制在5分鐘內(nèi)，如標本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。請每次測定的同時做標準曲線，最好做復孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標準品孔第一孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定，計算時請最后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。底物請避光保存。嚴格按照說明書的操作進行，試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。本試劑不同批號組分不得混用。10. 如與英文說明書有異，以英文說明書為準。計算：　　以標準物的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標， 　　在坐標紙上繪出標準曲線，根據(jù)樣品的OD 　　值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋 　　倍數(shù)；或用標準物的濃度與OD值計算出標 　　準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值 　　代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋 　　倍數(shù)，即為樣品的實際濃度?！　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　。ù藞D僅供參考）試劑盒性能：1.樣品線性回歸與預期濃度相關(guān)系數(shù)R值為 （詳見說明書）以上。2.批內(nèi)與批見應分別小于（詳見說明書）　　檢測范圍： 　　 詳見說明書（業(yè)務(wù)人員可提供） 　 保存條件及有效期：1.試劑盒保存：；2-8℃。2．有效期：6個月

關(guān)于ELISA試劑盒

ELISA試劑盒在國內(nèi)有許多種叫法，例如：ELISA檢測試劑盒、ELISA Kit、酶聯(lián)免疫試劑盒、酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒、酶聯(lián)免疫分析試劑盒、酶免試劑盒等，比較常見的叫法是ELISA檢測試劑盒、酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒等。

ELISA試劑盒自從60-70年代問世以來，得到全世界科研工作者的認可及推崇，在歐美及中國獲得很大的推廣，尤其是國內(nèi)生化領(lǐng)域的長足發(fā)展。

Elisa生物試驗是一種敏感性高，特異性強，重復性好的實驗診斷方法。由于其試劑穩(wěn)定、易保存，操作簡便，結(jié)果判斷較客觀等因素，已廣泛應用在免疫學檢驗的各領(lǐng)域中。ELISA檢測試劑盒適用于體外定性檢測人血清或血漿中的抗人類戊型肝炎（HEV）病毒 IgM 抗體ELISA檢測。

免疫測定技術(shù)的基礎(chǔ)在于抗原抗體之間的特異結(jié)合反應，所以任何優(yōu)質(zhì)的診斷試劑離不開優(yōu)質(zhì)的原料，如抗原抗體，酶等。以前用于免疫測定的抗原通常為各種純化抗原，而抗體則為純化抗原免疫動物后獲得的多克隆抗體和使用雜交瘤技術(shù)得到的單克隆抗體，而抗原或抗體的標記物如酶標結(jié)合物則通過各種化學合成方法制備。近年來，隨著分子生物學的發(fā)展，使用基因工程方法制備各種特殊的抗原或抗體及其酶結(jié)合物等免疫測定試劑幾成為現(xiàn)實的新一代試劑，各種新型使用的測定方法也不斷出現(xiàn)。

HBsAg試劑特點（檢測模式：臨床抗體夾心法）：包被抗體為山羊多抗。多抗具有高親和性和對抗原各種表位的反應性。酶表抗體為與HBsAg有不同結(jié)合位點的鼠復合單位，可測得HBsAg變異樣品，提高檢測的特異性（99.98%）提高檢測的靈敏度，應用Parl Ehrich 學說（PEI）HBsAg標準品，對ad標準品的靈敏度為0.05ng/ml對ay標準品靈敏度為0.025ng/ml

ELISA檢測試劑盒應用定性夾心免疫檢測技術(shù)，用合成的HEV多肽抗原包被微孔板板條，這些多肽是中國型HEV毒株核心氨基酸序列中抗原性很強的肽段，分別來自于該毒株的開放閱讀框2和開放閱讀框3。將樣品或標準品加入孔中并孵育，如果其中存在HEV IgM抗體，這些抗體就會與HEV 的多肽抗原結(jié)合，并固定在上面，洗板除去其它非特異性抗體和樣品中的其它成份。然后加入羊抗人IgM-HRP（辣根過氧化物酶）酶結(jié)合物，經(jīng)第二次孵育后，酶結(jié)合物就會與第一次孵育結(jié)合上的HEV IgM抗體相結(jié)合，洗板除去未結(jié)合的酶結(jié)合物，加入TMB底物溶液，在第三次孵育時會發(fā)生酶-底物反應，只有那些含有HEV IgM抗體和酶結(jié)合物所形成的復合物的孔才會發(fā)生顏色變化，加入硫酸溶液終止酶和底物間的反應，并在波長: 450nm處測量O.D.值,按照本HEV IgM抗體elisa試劑盒的測試標準, O.D.值大于或等于Cut-Off值的樣品被認為是初試陽性。

LISA的基礎(chǔ)是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標記。結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學活性，酶標記的抗原或抗體既保留其免疫學活性，又保留酶的活性。在測定時，受檢標本（測定其中的抗體或抗原）與固相載體表面的抗原或抗體起反應。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復合物與液體中的其他物質(zhì)分開。再加入酶標記的抗原或抗體，也通過反應而結(jié)合在固相載體上。此時固相上的酶量與標本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。加入酶反應的底物后，底物被酶催化成為有色產(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，故可根據(jù)呈色的深淺進行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，間接地放大了免疫反應的結(jié)果，使測定方法達到很高的敏感度。 ELISA可用于測定抗原，也可用于測定抗體。

然而，影響Elisa試驗結(jié)果的因素很多，故加強各個環(huán)節(jié)的質(zhì)量保證才能充分發(fā)揮其方法學的優(yōu)點。

特點：一、高效、靈敏、特異的抗體；　　二、穩(wěn)定的重復性和可靠性；　　三、吸附性能好，空白值低，孔底透明度高的固相載體；　　四、適用血清、血漿、組織勻漿液、細胞培養(yǎng)上清液、尿液等等多種標本類型；　　五、節(jié)省實驗經(jīng)費。

elisa試劑盒回收率是反應待測物在樣品分析過程中的損失的程度，損失越少，回收率越高，如果作標液1PPM，就是1毫克/升，而作出標準數(shù)據(jù)為0.99毫克/升，就是說你的回收率是99%，這個與真實成分有密切的關(guān)系，說明方法的準確度。比如水中總無機氯含量測定，樣品水中含有無機氯20mg/L，取100mL被測水樣品，加入0.1mL濃度為10mg/mL的含無機氯標準樣品，測定時忽略體積變化，如果測定出樣品中無機氯為2.98mg/L，則認為回收率為99%。

安全性

1． 避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體，請盡快用水沖洗。

2． 實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。

3． 不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。

4． 試劑應按標簽說明書儲存，使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄，不可保存。

5． 實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。

6． 不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。

7． 使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器。

8． 使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。

9． 洗滌酶標板時應充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。

10． 底物A應揮發(fā)，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。

11． 加入試劑的順序應一致，以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。

12． 按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。

elisa試劑盒測試要求

做好對照

正式試驗時，應分別以陽性對照與陰性對照控制試驗條件，待檢樣品應作一式二份，以保證實驗結(jié)果的準確性。有時本底較高，說明有非特異性反應，可采用羊血清、兔血清或BSA等封閉。

實驗條件的選擇

在ELISA中，進行各項實驗條件的選擇是很重要的，其中包括:

（1）　固相載體的選擇：許多物質(zhì)可作為固相載體，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體，在使用前均可進行篩選：用等量抗原包被，在同一實驗條件下進行反應，觀察其顯色反應是否均一性，據(jù)此判明其吸附性能是否良好。

（2） 包被抗體（或抗原）的選擇：將抗體（或抗原）吸附在固相載體表面時，要求純度要好,吸附時一般要求PH在9.0～9.6之間。吸附溫度，時間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃ 18～24小時。蛋白質(zhì)包被的最適濃度需進行滴定：即用不同的蛋白質(zhì)濃度（0.1、1.0和10μg/ml等）進行包被后，在其它試驗條件相同時，觀察陽性標本的OD值。選擇OD值最大而蛋白量最少的濃度。對于多數(shù)蛋白質(zhì)來說通常為1～10μg/ml。

（3）　酶標記抗體工作濃度的選擇：首先用直接ELISA法進行初步效價的滴定（見酶標記抗體部份）。然后再固定其它條件或采取“方陣法”（包被物、待檢樣品的參考品及酶標記抗體分別為不同的稀釋度）在正式實驗系統(tǒng)里準確地滴定其工作濃度。

（4）　酶的底物及供氫體的選擇：對供氫體的選擇要求是價廉、安全、有明顯地顯色反應，而本身無色。有些供氫體（如OPD等）有潛在的致癌作用，應注意防護。有條件者應使用不致癌、靈敏度高的供氫體，如TMB和ABTS是目前較為滿意的供氫體。底物作用一段時間后，應加入強酸或強堿以終止反應。通常底物作用時間，以10-30分鐘為宜。底物使用液必須新鮮配制，尤其是H2O2在臨用前加入。

檢測范圍和靈敏度不同，用量少時，可使用分裝，前期是它的長久性不是很好。

試劑盒的標準曲線最高點OD 值均在2.0±0.2，零孔的OD 值都控制在0.10以下。

試劑盒的標準曲線相關(guān)系數(shù)R≥0.98。

試劑盒重復性好，板內(nèi)、板間變異系數(shù)均<9 %。

試劑的組份都多給20%的富余量，確保完成48/96孔的檢測，避免分次檢測可能造成試劑量不足的情況。

檢測抗體及酶結(jié)合物的稀釋度合適(均為1:30), 方便試驗操作者準確地做稀釋工作，保證實驗結(jié)果的重復性

ELISA法是免疫診斷中的一項新技術(shù)，現(xiàn)已成功地應用于多種病原微生物所引起的傳染病、寄生蟲病及非傳染病等方面的免疫診斷。也已應用于大分子抗原和小分子抗原的定量測定，根據(jù)已經(jīng)使用的結(jié)果，認為ELISA法具有靈敏、特異、簡單、快速、穩(wěn)定及易于自動化操作等特點。不僅適用于臨床標本的檢查，而且由于一天之內(nèi)可以檢查幾百甚至上千份標本,因此，也適合于血清流行病學調(diào)查。本法不僅可以用來測定抗體，而且也可用于測定體液中的循環(huán)抗原，所以也是一種早期診斷的良好方法。因此ELISA法在生物醫(yī)學各領(lǐng)域的應用范圍日益擴大

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