人1,3-βD葡葡糖苷酶(1,3-βD-Glu)酶聯(lián)免疫分析試劑盒說明書產(chǎn)品簡(jiǎn)介:
本試劑盒用于測(cè)定人血清、血漿及相關(guān)液體樣本中 1,3-βD 葡葡糖苷酶(1,3-βD-Glu) 表達(dá)。
人1,3-βD葡葡糖苷酶(1,3-βD-Glu)酶聯(lián)免疫分析試劑盒說明書工作原理:
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中人 1,3-βD 葡葡糖苷酶(1,3-βD-Glu)表達(dá)。用純化的 人 1,3-βD 葡葡糖苷酶(1,3-βD-Glu)抗體包被微孔板,制成固相抗體,可與樣品中 1,3-βD 葡葡糖苷酶(1,3-βD-Glu)相結(jié)合,經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗原和其他成分后再與 HRP 標(biāo)記的 1,3-βD 葡葡糖苷酶(1,3-βD-Glu)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過徹底洗 滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終 的黃色。用酶標(biāo)儀在 450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD 值),與 CUTOFF 值相比較,從而判定 標(biāo)本中人 1,3-βD 葡葡糖苷酶(1,3-βD-Glu)的存在與否。
人1,3-βD葡葡糖苷酶(1,3-βD-Glu)酶聯(lián)免疫分析試劑盒產(chǎn)品規(guī)格: 1 | 30 倍濃縮洗滌液 | 20ml×1 瓶 | 7 | 終止液 | 6ml×1 瓶 |
2 | 酶標(biāo)試劑 | 6ml×1 瓶 | 8 | 陽(yáng)性對(duì)照 | 0.5ml×1 瓶 |
3 | 酶標(biāo)包被板 | 12 孔×8 條 | 9 | 陰性對(duì)照 | 0.5ml×1 瓶 |
4 | 樣品稀釋液 | 6ml×1 瓶 | 10 | 說明書 | 1 份 |
5 | 顯色劑 A 液 | 6ml×1 瓶 | 11 | 封板膜 | 2 張 |
6 | 顯色劑 B 液 | 6ml×1/瓶 | 12 | 密封袋 | 1 個(gè) |
1.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能 馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2.不能檢測(cè)含 NaN3 的樣品,因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。 操作步驟
1. 編號(hào):將樣品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào),每板應(yīng)設(shè)陰性對(duì)照 2 孔、陽(yáng)性對(duì)照 2 孔、空白對(duì)照 1
孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)
2. 加樣:分別在陰、陽(yáng)性對(duì)照孔中加入陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照 50µl。然后在待測(cè)樣品孔先 加樣品稀釋液 40µl,然后再加待測(cè)樣品 10µl。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不 觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻,
3. 溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。
4. 配液:將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置 30 秒后棄去,如此
重復(fù) 5 次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑 50µl,空白孔除外。
7. 溫育:操作同 3。
8. 洗滌:操作同 5。
9. 顯色:每孔先加入顯色劑 A50µl,再加入顯色劑 B50µl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色
15 分鐘.
10. 終止:每孔加終止液 50µl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。
11. 測(cè)定:以空白空調(diào)零,450nm 波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD 值)。 測(cè)定應(yīng)在加終止 液后 15 分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
計(jì)算和結(jié)果判定:
試驗(yàn)有效性:陽(yáng)性對(duì)照孔平均值≥1.00; 陰性對(duì)照平均值≤0.10 臨界值(CUT OFF)計(jì)算:臨界值=陰性對(duì)照孔平均值+0.15
陰性判定:樣品 OD 值< 臨界值(CUT OFF)者為 1,3-βD 葡葡糖苷酶(1,3-βD-Glu) 陰性
陽(yáng)性判定:樣品 OD 值≥ 臨界值(CUT OFF)者為 1,3-βD 葡葡糖苷酶(1,3-βD-Glu)
陽(yáng)性.
人1,3-βD葡葡糖苷酶(1,3-βD-Glu)酶聯(lián)免疫分析試劑盒注意事項(xiàng):1.操作嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行,本試劑不同批號(hào)組分不得混用。
2.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未 用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
3.濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,洗滌時(shí)不影響結(jié)果。
4. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
5.底物請(qǐng)避光保存。
6.試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn),使用雙波長(zhǎng)檢測(cè)時(shí),參考波長(zhǎng)為 630nm
7.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。終止液為 2M 的硫酸,使用時(shí)必須 注意安全。
人1,3-βD葡葡糖苷酶(1,3-βD-Glu)酶聯(lián)免疫分析試劑盒儲(chǔ)存方式:1.試劑盒保存:;2-8℃。
2.有效期:6 個(gè)月
主要用途:通用型線粒體DNA的片段常見缺失(CD4977)定性分析試劑盒是一種旨在從動(dòng)物細(xì)胞或組織中分離出完整而純化的線粒體細(xì)胞器的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。適合于動(dòng)物軟組織(肝或腦組織)和培養(yǎng)細(xì)胞的線粒體的制備。其制備物產(chǎn)量高,可以被用于細(xì)胞凋亡、信號(hào)傳遞、能量代謝、蛋白組學(xué)和病理生理學(xué)等的研究。產(chǎn)品不含污染性蛋白酶和核酶,即到即用,性能穩(wěn)定,分離產(chǎn)量和純度堪稱同類產(chǎn)品最佳。
通用型線粒體DNA的片段常見缺失(CD4977)定性分析試劑盒注意事項(xiàng)
1. 本產(chǎn)品為10次(1克動(dòng)物組織或5 X 107細(xì)胞)或50次(200毫克動(dòng)物組織或1 X 107細(xì)胞)操作
2. 實(shí)際操作的動(dòng)物組織重量或細(xì)胞量與試劑使用量按比例調(diào)整:例如200毫克動(dòng)物組織:試劑用量是標(biāo)準(zhǔn)用量的五分之一
3. 所有操作均須嚴(yán)格在4℃或以下狀態(tài)進(jìn)行
4. 操作時(shí),須戴手套
5. 操作時(shí),須無菌操作,避免污染母液,尤其是裂解液(Reagent B)和保存液(Reagent E)
6. 建議使用足夠的樣品量
7. 建議嚴(yán)格控制操作時(shí)間
8. 通常勻化次數(shù)為20至40下(或細(xì)胞顆粒群/組織塊狀消失為止)達(dá)到80%的細(xì)胞裂解為理想狀態(tài),但不同的組織或細(xì)胞類型會(huì)存在差異。用戶可以通過顯微鏡觀察3微升勻漿物的細(xì)胞裂解程度:完整細(xì)胞呈現(xiàn)發(fā)亮的圓環(huán)。低于50%可以增加勻化次數(shù)
9. 通常孵育5分鐘(不宜超過5分鐘)達(dá)到80%的細(xì)胞裂解為理想狀態(tài),但不同的組織或細(xì)胞類型會(huì)存在差異。用戶可以通過顯微鏡觀察3微升裂解物的細(xì)胞裂解程度:完整細(xì)胞呈現(xiàn)發(fā)亮的圓環(huán)。低于50%可以增加孵育時(shí)間和渦旋震蕩次數(shù)
10. 對(duì)于難以裂解的細(xì)胞,例如HeLa細(xì)胞,采用物理勻漿法是優(yōu)先推薦的技術(shù)處理
11. 通常1克動(dòng)物組織或5 X 107細(xì)胞的線粒體含量為50微克以上線粒體蛋白
12. 如果需要計(jì)量線粒體,稀釋后數(shù)分鐘內(nèi)完成,否則線粒體將分解
13. 本產(chǎn)品所獲得的線粒體純度和產(chǎn)量最為理想。通過調(diào)整10000g離心速度到3000至8000g,可以提高粗提的線粒體純化程度,但線粒體產(chǎn)量相應(yīng)減少
14. 如果需要獲得99%以上純度的線粒體,使用動(dòng)物細(xì)胞/組織高質(zhì)純化線粒體分離試劑盒-GMS10006.3
15. 線粒體正;钚詼y(cè)定方法是: CITRATE SYNTHASE活性、氧化磷酸化、細(xì)胞色素吸收峰譜等
16. 線粒體內(nèi)外膜完整測(cè)定方法是:CYTOCHROME C OXIDASE活性和熒光JC染色
17. 本公司提供線粒體套餐:ROS、NAO、MitoTRACK、JGB、線粒體溶解等
18. 本公司提供系列線粒體分析試劑產(chǎn)品
通用型線粒體DNA的片段常見缺失(CD4977)定性分析試劑盒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)
1. 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
2. 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定分離的線粒體內(nèi)外膜完整
3. 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定分離的線粒體維持正;钚
4. 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定不含污染性蛋白酶和核酶
通用型線粒體DNA的片段常見缺失(CD4977)定性分析試劑盒 保存方式
保存凈化液(Reagent C)在-20℃冰箱里,其余的保存在4℃冰箱里,有效保證6月
通用型線粒體DNA的片段常見缺失(CD4977)定性分析試劑盒其他產(chǎn)品:
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